谷丙转氨酶（alt/gpt）测试盒的测定原理
（微板法）
一、测定原理：
谷丙转氨酶（alt）在37℃及ph7.4条件下，作用于丙
氨酸及α-酮戊二酸组成的底物，生成丙酮酸及谷氨酸。反应
30min后（固定时间）加入2,4-二硝基苯肼（dnph）盐酸溶
液，既中止反应，同时dnph与酮酸中羰基加成，生成丙酮
酸苯腙。苯腙在碱性条件下呈红棕色，于505nm比读吸光度
并计算酶活力。
二、试剂的组成与配制：(96t)
试剂一:谷丙转氨酶基质液,5ml×1瓶，4℃冰箱保存6个月；
试剂二:2,4—二硝基苯肼液,5ml×1瓶，4℃冰箱保存6个月；
试剂三:4mol/l氢氧化钠液,5ml×1瓶，室温密封保存6个月；
0.4mol/l氢氧化钠液的配制,临用时按4mol/l氢氧化钠液:双
蒸水=1∶9的比例稀释，需多少配多少，室温密封保存。
试剂四:2mmol/ml丙酮酸钠标准液×1支，4℃冰箱保存6个月；
试剂五:0.1mol/l磷酸盐缓冲液×1支，4℃冰箱保存6个月。
三、操作过程：
1、样本前处理:
①、血清（浆）及其它液体样本待测：直接测定。
②、动物组织样本：准确称取组织重量，按重量（g）：体积
(ml)=1:9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件
下机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，取上清液待测。
③、培养细胞样本前处理：将收集好的细胞用等渗缓冲液（推
荐0.1mol/l ph7～7.4磷酸盐缓冲液或生理盐水）清洗1～
2次；1000转/分,离心10分钟,弃上清,留细胞沉淀，加入匀
浆介质（推荐加入0.1mol/l ph7～7.4磷酸盐缓冲液或生
理盐水），冰水浴条件下超声破碎或手动匀浆，制备好的
匀浆液不离心，待测。
2、操作表:
1、比色法中常用的有赖氏（reitman-frankel）法及金氏（king）
法。赖氏法标准曲线所定单位数，是用实验方法和卡门氏分
光
光度法（速率法）作对比测定求得的。以卡门氏单位报
告结果，比较准确。
卡门氏单位定义：1ml液体，反应液总容量3ml，波长340nm，
1cm光径，25℃，1min内所生成的丙酮酸，使nadh氧化
成nad+而引起吸光度每下降0.001为一个单位（1卡门氏
单位=0.482 u/l，25℃）。
2、一般血清标本内源性酮酸很少，血清对照孔吸光度值接近试
剂空白孔（以双蒸水代替血清，其他和对照孔同样操作）。
所以，成批标本测定时，一般不需要每一标本都作本身血清
对照孔，以试剂空白孔代替即可，但对脂血、黄疸或溶血血
清，每份标本应作对照孔。
3、酶活力超过150卡门氏单位时，用生理盐水稀释血清后重测。
4、应将一般血清的对照孔（或称标本空白孔）的吸光度作为日
常质控的指标之一；如相差大，可考虑α-酮戊二酸浓度、dnph
浓度及仪器等原因引起。
5、血清中alt在室温（25℃）可保存2天，在0～4℃可保存一
周，在-25℃可保存1个月。
附录ⅰ：alt标准曲线
1、操作表:
附录ⅱ：组织中alt测定
1、样本前处理：
准确称取组织重量,按重量(g):体积(ml)=1:9的比例,加入9倍体
积的生理盐水,冰水浴条件下机械匀浆,制成10%的组织匀浆,2500
转/分,离心10分钟,取上清液,再用生理盐水稀释到适宜浓度(通过标
准曲线后计算得匀浆液卡门氏单位值小于150)待测。(取部分上清
液测蛋白浓度,蛋白定量试剂盒本所有售)
2、操作表：
组织中活力=通过标准曲线得¸待测匀浆液蛋白
匀浆液alt活力 浓度
附录ⅲ：血清（浆）中alt测定
1、前处理：
血清(浆)直接取样进行测定。（若酶活力超过150卡门氏单位
时，需用生理盐水稀释血清后重新测定）
2、操作表：
谷丙转氨酶（alt/gpt）测试盒的测定原理