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紫河车LAMP鉴定试剂盒使用方法

紫河车lamp鉴定试剂盒使用方法:
一、样品采集:
1、食品样品:样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照《食品卫生微生物学检验阪崎肠杆菌检验要求进行。
2、血液样品:用无菌注射器抽取受检者静脉血2ml,注入无菌edta2na(或柠檬酸钠)抗凝管,立即混匀。
3、粪便样品:取粪便置于灭菌的收集管中送检。
4、病灶部位样品:取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
一、稀释 pcr 阳性对照(以 10e2-10e7 拷贝/μl 这 6 个 10 倍稀释度为例)
1. 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的 dna段作为阳性对照。
2. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
3. 用带芯枪头分别加入 45 μl 荧光 pcr 模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4. 在 7 号管中加入 5 μl 1×10e8 拷贝/μl 的阳性对照,充分震荡 1 分钟,得1×10e7 拷贝/μl 的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μl 1×10e7 拷贝/μl 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10e6 拷贝/μl 的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μl 1×10e6 拷贝/μl 的阳性对照到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 1×10e5 拷贝/μl 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
注:上述样品建议经过增菌后,收集培养物用于检测。 
二、dna提取:
可采用pcr试剂盒配备的dna抽提液,按以下说明进行dna核酸的粗提。也可采购上海泽叶生物科技有限公司生产的dna提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
1、液体培养物:取液体培养物100μl加到1.5ml无菌离心管中,8000rpm离心3min,尽量吸弃上清,加入50μl dna抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min,取上清5μl进行pcr反应。
2、固体培养物:挑取单克隆菌落与50μl dna抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min,取上清5μl进行pcr反应。
3、粪便样品:挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中,加入0.5ml生理盐水,振荡混匀,13000rpm离心3分钟,弃上清,沉淀中加入50μl dna抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min取上清5μl进行pcr反应。
4、其他液体标本:取标本2-3ml,13000rpm离心3min,弃上清,沉淀中加入50μl dna抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min取上清5μl进行pcr反应。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5μl加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议在样品制备区域加入阳性对照。 
apba1β淀粉样前体蛋白结合蛋白1抗体
apolipoprotein e载脂蛋白e抗体
afp甲胎蛋白afp抗体
ae2阴离子交换蛋白2抗体
aconitase 1铁调节蛋白1抗体
atad3a三磷酸腺苷酶家族蛋白3a抗体
apoj载脂蛋白j抗体
apoh载脂蛋白h抗体
art4二磷酸腺苷核糖基转移酶4抗体
akirin2akirin2蛋白抗体
arl8badp核糖基化样因子8b抗体
atad2三磷酸腺苷酶家族蛋白2抗体
akirin1akirin1蛋白抗体
asz1锚定蛋白样蛋白1抗体
adenylate kinase 2腺苷酸激酶2抗体
acrosin精子顶体前体蛋白抗体
aim1l黑色素瘤缺失样蛋白1抗体
aer61未知糖基化转移酶aer61抗体
fe65铁蛋白fe65抗体
arhi抑癌基因ras同源家族1抗体
ap2 alpha转录激活蛋白2α/tfap2α/ap-2α抗体
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