多年来,酵母菌在生物化学、遗传和分子分析等方面取得了大量的研究成果,已成为生物制药研究者的模型生物系统和工具。因此,酵母已成为基因表达研究和重组蛋白的常用载体。尽管研究中使用的酵母种类很多,包括pichia、hansen和debali酵母,但酵母是常用的。
传统的酶法很难从细胞中提取完整的酵母rna和细胞内蛋白。*通常是粗制滥造的,含有rna酶和蛋白酶,不仅破坏细胞壁,而且破坏靶分子。此外,原生质体的酶解通常需要添加洗涤剂,这会导致各种蛋白质的失活。因此,机械裂解或破坏酵母细胞通常需要释放小分子。
1、粉碎前的准备:
0.1g细菌(本实验以0.1g菌体为例);xx钢珠;研磨机(选用品牌新锐精仪gd-300);xx研磨罐。
2、磨削加工。
将0.1g细菌与30mlpbs溶液混合,用移液管均匀滴入液氮。收集冷冻的球。频率调整到xxhz,振动时间为xxs。取出研磨罐,放入液氮预冷xxs,取出再研磨。