烟草的培养基,在植物组织培养时,通过调节iaa和ctk的比值能影响愈伤组织分化出根或芽。
ctk/iaa高时,愈伤组织分化芽。ctk/iaa低时,分化根。ctk/iaa比例适中维持愈伤组织不分化。
愈伤组织诱导培养基制备,以ms培养基母液为基础,向洁净铝锅中顺序加入大量元素20×母液100ml,微量元素100×母液20ml,铁盐100×母液20ml,维生素100×母液20ml,肌醇200×母液10ml,*200×母液10ml,配制得ms培养基后,再加入0.5mg·l-1的ba8ml,0.5mg·l-1的naa8ml.然后加入实际配制培养基体积约2/3-3/4的蒸馏水,加入40g蔗糖后搅拌使其溶化,用0.5mol·l-1的naoh和0.5mol·l-1的hcl调整ph值至5.8-6.0.加入14g琼脂,将铝锅置于电炉上,搅拌加热使琼脂*溶化,然后用蒸馏水定容至终体积2l,继续加热几分钟使之混合均匀后分装于三角瓶中。
取一无菌培养皿,用*切取1-2片无菌苗叶片置于无菌培养皿中,并用*将叶片切成2mm2左右的小片,然后将其接种于准备好的培养基上,每瓶接种5小片,一共接种6瓶。接种后的三角平置于24条件下黑暗培养1周,然后在同样温度下有光照和全黑暗下培养3周直至愈伤组织形成(两种情况各置3瓶).观察愈伤组织诱导结果,统计愈伤组织诱导率。
器官分化及植株再生培养将诱导的愈伤组织按类型分别转入分化培养基上,置于连续光照,温度20-22c条件下培养3周,统计愈伤组织再生植株情况。
烟草愈伤组织诱导培养4周后,愈伤组织基本形成,即排除因生长时间不够而未形成愈伤的情况。具体情况见表一中所示,6瓶培养物均有愈伤形成,且都未发生污染,但诱导率几乎各不相同.其中,在光照条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为60.0℅,在黑暗条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为46.7%。由于实验过程中,外植体即烟草叶片取得偏小,接种时可能已有部分外植体的大部分细胞脱水死亡,使整个实验的愈伤组织诱导率偏低,愈伤块偏小。