elisa定量检测试剂盒实验步骤
1. 100 ml 含重组表达质粒的菌体诱导后，离心5 000 g×5 min，弃上清，收获菌体，用10 ml预冷的b/w缓冲液重悬。
2. 重悬液于冰上超声处理，直至样品不再粘稠，4℃离心 14 000 g×30 min，取上清液，0.45 μm膜抽滤后作为样品液。
3. 将结合t7 tag抗体的琼脂充分悬起，平衡至室温，装入层析柱中。
4. b/w缓冲液平衡后样品液过柱。
5. 10 ml b/w缓冲液过柱，洗去未结合蛋白。
6. 用5 ml洗脱缓冲液过柱，每次1 ml，洗脱液用含150 μl中和缓冲液的离心管收集，混匀后置于冰上，直接sds-page分析。
7. 将洗脱下来的蛋白放入透析袋中，双蒸水透析24 h，中间换液数次。
8. 用peg 20000浓缩蛋白。
注意事项
蛋白在过层析柱前，要0.45 μm膜抽滤，否则几次纯化后，柱子中会有不溶物。
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