1.取出人源细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里，pbs洗三遍。
注意：有的时候作的细胞爬片可能比较小，因此夹取的时候要小心，注意 反正面，放在皿里洗比较方便，避免了来回夹取，另外洗的时候加pbs不要太冲，不要细胞冲下来。洗的时候我都是多加pbs，稍晃一下就倒掉，没有等5分钟或10分钟。
2. 4%冷的多聚甲醛固定20分钟，pbs洗三遍。
3. 0.2%triton x-100通透10分钟，pbs洗三遍。
4. 人源细胞与二抗相同宿主的血清封闭30分钟，pbs洗三遍。
5. 一抗4度湿盒内过夜，也可37度2小时，感觉前者效果好，pbs洗三遍。
6.二抗室温2小时(避光)，或者37度1半小时，pbs洗三遍。
7.用dapi染核，然后直接照荧光片。
8.蒸馏水洗掉pbs，甘油封片，指甲油封片子的四周，因为甘油不象树脂那样会干，所以不用指甲油封的话会弄的一塌糊涂。
建议：1.人源细胞还是染完之后没有封片前直接照一些，因为有的时候可能封片会出现问题，再想照反而没有了，另外不要拖太长时间，荧光会崔灭的。2.荧光的片子一定要避光保存，保存的好的话，过一段时间仍然能照出很好的片子。3.二抗用之前一定离心，不然有的时候有那种沉淀，在片子上就是一个很大的非特异性荧光光点，非常难看。