1.hat选择杂交瘤细胞 脾细胞和骨髓瘤细胞经peg处理后形成多种细胞的混合体,只有脾细胞与骨髓细胞形成的杂交瘤细胞才有意义。在hat选择培养液中培养时,由于骨髓瘤细胞缺乏胸苷激酶或次黄嘌呤*核糖转移酶,故不能生长繁殖,而杂交瘤细胞含有上述两种酶,在hat选择培养液中可以生长繁殖。用hat选择培养1~2d内将有大量瘤细胞死亡,3—4d后瘤细胞消失,杂交细胞形成小集落。hat选择培养液维持7一tod后应换用ht培养液,再维持2周,改用一般培养液。在上述选择培养期间,杂交瘤细胞布满孔底l/10面积时,即可开始检测特异性抗体,筛选出需要的杂交瘤细胞系。在选择培养期间,一般每2~3d更换一半的培养液。
2.抗体的检测 检测抗体的方法应根据抗原的性质、抗体的类型不同选择不同的筛选方法,一般以快速、简便、特异、敏感为原则。常用的方法有以下4种。
(1)ria可用于可溶性抗原、细胞mcab的检测。
(2)elisa可用于可溶性抗原、细胞和病毒等mcab的检测。
(3)免疫荧光试验适合于细胞表面抗原的mcab的检测。
(4)其他如iha、细胞毒性试验等。