血清总补体溶血活性（ch50）测定方法
一、原理
利用绵羊细胞与相应抗体（溶血素）结合成的复合物，可激活血清中的补体，导致红细胞溶解，当红细胞和溶血素量一定时，在规定反应的时间内，溶血程度与补体量及活性呈正相关。在接近50%溶血（ch50）时，二者之间近似直线关系，故以50%溶血作为最敏感的判断终点。以引起50%溶血所需的最小补体量为一个ch50u，可计算出待测血清中总的补体溶血活性，以ch50u/ml表示。
本实验主要反映补体经典活化途径的溶血功能，其结果与补体c1～c9各组成分的量及活性均有关。
二、试剂及配制
1.缓冲生理盐水：
（1）贮存液：
na2hpo4.12h2o2.85g
kh2po40.27g
nacl17.00g
蒸馏水定容至100ml，4℃保存备用
（2）应用液：5ml贮存液加95ml蒸馏水，再加10%硫酸镁0.1ml，当日配制，12小时内使用。
2.2%绵羊红细胞：无菌采取绵羊血液，于等量alsever液中可保存3周。用前以缓冲液洗3次，并配成2%细胞悬液。必要时可用吸光光度法或细胞计数法使悬液细胞浓度标 准化。
3.溶血素：将绵羊红细胞溶血素（效价1:4000），用应用液做1:2000倍稀释（即1ml溶血素加1999ml应用液）。
4.待测血清：新鲜血液室温放置30min，再4℃放置60min，使血块收缩，4℃离心（3000r/min）10min，取上清，-20℃保存。
三、操作步骤
试管法（改良mayer法）
1.致敏羊红细胞：2%绵羊红细胞加等量稀释后的溶血素（1:2000），混匀，置37℃水浴30min。
2.稀释血清：待测血清0.2ml，加应用液3.8ml，稀释度为1:20。
3.配制溶血标准管：全溶血管:2%绵羊红细胞2ml加8ml蒸馏水，混匀。50%溶血管:取全溶血管液2ml加缓冲液2ml。
4.按表所示，依次加各成分于试管中，混匀，置37℃水浴30min，第10管为非溶血对照：
补体ch50测定试管法
成分
试管号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1:20待测血清（ml）
0.10
0.15
0.20
0.25
0.30
0.35
0.40
0.45
0.50
-
应用液(ml)
1.40
1.35
1.30
1.25
1.20
1.15
1.10
1.05
1.00
1.50
致敏红细胞（ml）
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
5.结果测定：取出试管，2000r/min离心10min，对照管应不溶血。肉眼比色，选与50%溶血标准管相近二管，再用分光光度计测（波长542nm、0.5cm比色杯）od值，确定与标准管最接近者为终点管，然后按下公式计算ch50值：血清补体ch50（u/ml）=（1/血清用量）×稀释度。
如第5管为终点管，测待测血清中ch50为66.7u/ml。血清补体ch50正常值为50-100u/ml。
关键词：分光光度计