试剂盒选用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附实验(elisa)。往预先包被人性别决议区y框蛋白9(sox9)捕获抗体的包被微孔中,依次参加标本、规范品、hrp标记的检测抗体,通过温育并*洗刷。
免责声明
1. 试剂盒仅供研讨运用,不得用于临床实验或人体实验,否则所发生的一切结果,由实验者承当,本公司概不负责。
2. 严厉依照说明书操作,实验者违背说明书操作,结果由实验者承当。
操作过程
1、加酶:每孔参加酶标试剂50μl,空白孔在外。
2、温育:操作同3。
3、洗刷:操作同5。
4、显色:每孔先参加显色剂a50μl,再参加显色剂b50μl,悄悄震动混匀,37℃避光显色15分钟。
5、停止:每孔加停止液50μl,停止反应(此时蓝色立转黄色)。
6、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(od值)。 测定应在加停止液后15分钟以内进行。
7、加样:别离设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其他各步操作相同)、规范孔、待测样品孔。在酶标包被板上规范品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl然后再加待测样品10μl(样品终究稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,悄悄晃动混匀。
8、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
9、配液:将30倍浓缩洗刷液用蒸馏水30倍稀释后备用
10、洗刷:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗刷液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。