琼脂糖凝胶电泳
步骤一、用蒸馏水将电泳槽和梳子冲洗干净.放在水平桌面上,并架好梳子.
步骤二、根据核酸分子量的大小配制不同浓度的琼脂糖凝胶,一般200~400bp的dna片段, 可配制1.2~1.7%浓度的琼脂糖用于电泳.
步骤三、配制0.5xtbe电泳缓冲液100ml于三角烧瓶中,称取一定量的琼脂糖粉放入后沸水锅 或微波炉内加热熔化.冷却至60℃(需要时可加入溴乙锭),倒入电泳槽中,待凝固.
步骤四、向电泳槽中倒入0.5xtbe,其量以没过胶面2mm为宜,小心移去梳子.如样品孔内有 气泡,应设法除去.
步骤五、在dna样品中加入0.2体积的载样缓冲液,混匀后,加入样品孔内.
步骤六、接通电源,一般红色为正极黑色为负极,切记dna样品由负极往正极泳动(靠近加样 孔的一端为负).电压为1-5v/cm(长度以两个电极之间的距离计算).
步骤七、.根据指示剂泳动的位置,判断是否终止电泳.一般200~400bp的pcr产物50v电压, 电泳20~40min即可.
步骤八、溴化乙锭染色后,紫外仪上观察电泳带及其位置,并与核酸分子量标准比较被扩 增产物的大小.