前言： * (metronidazole, mtz) 是畜牧业生产中常用的一种硝基咪唑类药物，具有抗厌氧菌 和抗原虫作用，主要用于治疗鸡、火鸡的组织滴虫病、牛毛滴虫病，还可与其它抗生素联 合，用于治疗厌氧菌感染。但研究表明，该物质对人体具有神经毒性和潜在致癌性。鉴于 此，欧盟和美国食品*禁止在动物源性食品中使用*等硝基咪唑类药 物。2002 年 12 月，我国*修订了《动物性食品中兽药高残留*》，规定可使用 *治疗动物疾病，但禁止以抗应激、提高饲料报酬、促生长为目的将该药物用于所有 食品动物，并规定所有食品动物可食性组织中*的高残留*为零。为保障食品安 全，建立动物性食品中*残留的检测方法势在必行。 本研究利用 agilent bond elut plexa pcx 固相萃取柱净化鸡肉样品，并使用 agilent 1290 infinity ii 液相色谱系统/ 6460 三重四极杆液质联用系统分析样品中的*残留。
*分析 对试料进行样品前处理。从所取全部样品中取出可食部分约 500 g，剔除筋膜，用组织 匀浆机充分捣碎均匀，转入洁净容器中，密封并标记，于 –18 °c 以下冷冻存放。称取均 质样品 4 g（至 0.01 g）于 50 ml 具塞聚丙烯塑料离心管中，加入 40 μl 200 μg/l 同位素内标工作液（将*13c2- 15n2 标准品溶于甲醇从而完成制备），加入 4 ml 4% 氯化钠水溶液（分析纯度），涡旋混匀，超声处理 5 min，加入 20ml 乙酸乙酯（色谱纯 度）提取，涡旋混匀，9000 r/min 4 °c 离心 5 min，取 5 ml 上清液于 40 °c 氮气下吹 干，用 5 ml 0.1 mol/l 盐酸溶液复溶待净化。使用 agilent bond elut plexa pcx 固相萃取柱对所得样品提取液 进行净化和富集，具体操作如下：plexa pcx 固相萃取柱依次 用 5 ml 甲醇和 5 ml 纯水活化。将 5 ml 样品提取液分两次过 柱，依次用 0.1% 甲酸（色谱纯度）水溶液和甲醇（色谱纯度） 各 5 ml 淋洗，抽干柱子，用滤纸将柱子擦干净，用 5 ml 5% 氨 化甲醇分两次洗脱，收集洗脱液，40 °c 氮气吹至近干，用 1 ml 流动相重新溶解，过 0.2 μm agilent captiva rc 滤膜后，供仪器测定。 随后，使用 agilent 1290 infinity ii 液相色谱系统/6460 三重四极 杆液质联用系统对其中的*残留进行分析。液相色谱条件和 梯度程序如表 1 所示，质谱分析条件和部分质谱仪参数分别如 表 2 和表 3 所示。
本文采用同位素标记内标法定量。用甲醇溶解*标准品， 制备得到 100 μg/l 标准工作液，并逐级稀释、配制得到 0.1、 0.25、0.5、1.0、2.5、5、10 μg/l 系列标准溶液，并加入内标 工作液（同位素标记内标为*13c2- 15n2），使内标浓度均为 2.0 μg/l。以标准溶液浓度为横坐标，待测组分与内标物的峰面 积之比为纵坐标绘制标准曲线，按内标法计算样品中*的含 量。通过绘制曲线得到，在 0.1–10 µg/l 线性范围内，*的 线性相关性良好，相关系数 r > 0.995。
样品中待测物色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间一 致，变化范围应在 ±2.5% 之内。待测化合物定性离子的重构离 子色谱峰的信噪比 (s/n) ≥ 3，定量离子重构离子色谱峰的信噪 比 (s/n) ≥ 10。同一检测批次，样品中的两个子离子的相对丰度 比与浓度相当的标准溶液相比，各离子对的相对丰度应与校准溶 液的相对丰度一致，误差不超过表 4 中规定的范围。质谱分析所 得的色谱质谱图如图 1 所示，样品及样品加标总离子流图如图 2
在 0.5、1、2 μg/kg 的加标浓度下，每个加标浓度平行测定 6 次，进行方法回收率讨论。如表 5 所示，*的回收率为 78%–96%，rds ≤ 6.1%，表明该方法的回收率和精度*甲 硝唑的定量分析要求。 每 10 个样品测定 1 个加标回收率，样品数小于 10 个，至少测定 1 个加标回收率。回收率实验采用 0.5、1、2 μg/kg 三个加标浓 度，每个加标浓度平行测定 6 次，回收率和精度见表 5。通过对 加标样品的总离子流图进一步分析得到，按 3 倍信噪比测得的检 测限 (lod) 为 0.5 µg/kg，以 10 倍信噪比测得的定量限 (loq) 为 1.5 µg/kg。
本文所述使用 bond elut pcx 固相萃取柱和 1290 infinity ii 液相色谱系统/6460 三重四极杆液质联用系统分析鸡肉样品中*的 方法线性范围宽、样品回收率高、质谱信号良好，而且具有优异 的检测限 (lod) 和定量限 (loq)，在动物性食品兽药残留分析领 域有很好的应用前景。