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气相色谱法测定唾液乳杆菌发酵过程中有机酸测定

有机酸普遍存在于生物样品、食品、环境样品以及工业化学品中,但通常样品复杂且含量很低。色谱法是有机酸分析中zui常用的方法。用液相色谱法(紫外检测器)测定有机酸时,易受夹杂成分的干扰,引起较大误差;另外在测定小分子有机酸是需要较低的ph值,易引起色谱柱的流逝。气相色谱只能分析气态物质和具有挥发性的有机物,一般来说,气体和沸点及极性较低的液体,可以直接进样分析,但对于某些物质,由于它们的极性很强,挥发性、热稳定性较低,不适于直接进样分析,对于这类物质,可用化学处理,将其转化为相应的挥发性衍生物,在进行色谱分析,常用简单易行的方法有甲酯化、硅烷化等。
检测有机酸的色谱柱通常有两种db-5和ffap。使用db-5的柱子要求有机酸必须经过衍生化反应,ffap柱可以直接测定挥发性有机酸。利用气相色谱测定有机酸在食品、微生物等方面有报导。气相色谱测定对酸性代谢产物的测定也多有文章报道。
乳酸菌的应用十分广泛,市场上乳酸发酵支撑的产品,是农业、纺织、化工、医药等行业的重要原料。此外还有乳酸菌饮料、酸奶、酱油等不胜枚举。近年来,人们逐渐认识到乳酸菌的生理功能及其对人体健康的作用,使乳酸菌在食品和医药等方面具有广阔的应用前景。
目前,人们对乳酸菌带线的研究主要集中在源于丙酮酸的各种代谢路径,如双乙酰途径、丙酮酸-甲酸途径、丙酮酸-氧化酶途径、丙酮酸脱氧酶途径等,其中,由于双乙酰对发酵乳品品质其有重要影响,它赋予了很多乳制品奶油味。乳制品发酵过程中双乙酰的生成途径、生成条件及调控方式一直是研究人员关注的焦点。有机酸的检测可以为代谢途径的研究提供有力支持。唾液乳杆菌是乳酸菌的一种,具有益生功能,本文采用菌株来自功能乳品北京市共建重点实验室。
仪器准备
gc5890n气相色谱仪
样品处理:
1mg/ml的富马酸甲醇溶液,2mg/ml的丙酮酸、苹果酸、a-酮戊二酸、草酸、草酰乙酸甲醇溶液,0.024mg/ml的乳酸甲醇溶液,4mg/ml的丁二酸、异柠檬酸甲醇溶液合相同浓度的各有机酸混合标准液
色谱条件:
进样方式
不分流
进样口温度
280℃
程序升温
45℃保持2min,然后以6℃/min的速率升至180℃,再以10℃/min的速率升至260℃,保持5min
载气
氮气,流速2.2ml/min
进样量
1.μg
检测器温度
280℃
关键词:紫外检测器 色谱柱 气相色谱仪
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