生物提供近novoprotein近岸蛋白质一系列mrna体外合成酶及试剂，解决mrna疫苗的关键痛点。所有产品均采用药用规格原辅料生产，严格控制宿主蛋白质残留、核酸残留及常见病原体污染，符合gmp规范的产品生产与质量管理规程，保障生产过程及所有原辅料可追溯。
产品特点：
*gmp级mrna体外合成及修饰原料，animal-free，ampicillin-free
*产品生产、质量控制及配套文件体系，符合mrna疫苗及药物研发生产需求
*经过临床使用验证，单批次产能千万人份，年产能50亿人份
mrna疫苗的成功需要保证mrna的稳定性和高效翻译效率以及mrna的大量生成。
1、生成模板-质粒线性化 相关产品：bsa i，gmp grade(货号：gmp-re026)
此步将构建好的质粒酶切，处理成线性化双链dna模板，用于下一步mrna合成。
限制性内切酶bsa i 特异性识别双链dna中位点并进行酶切，可将模板质粒酶切线性化，作为mrna体外合成模板;
酶切位点：
产品特点：
强特异性
受cpg、dcm甲基化影响，剪切阻断
受ecobi甲基化影响，剪切可能受影响
不受dam甲基化影响
2、mrna体外合成
此步以dna为模板，在体外由rna聚合酶催化合成mrna。
t7 rna polymerase(t7 rna聚合酶)是高度特异识别t7启动子序列的5'→3' rna聚合酶，以含有t7启动子序列的单链或双链dna为模板，以ntp为底物，合成与启动子下游的单链dna互补的rna。t7 rna聚合酶是体外转录mrna的关键酶。
产品特点：
高度特异识别t7启动子
20ul反应体系，产量可达150ug
可对低至1ng模板进行有效转录
合成长度可达15k
体外转录产生的mrna，qsep1结果显示，纯度高，均一性好。
3、mrna转录后修饰：加帽加尾
此步对mrna进行修饰，合成功能完整的mrna。
完整mrna结构
3.1、mrna加帽(cap0)
此步与3.2同时进行，在mrna的5'端加上cap0帽结构，再将cap0转化为cap1结构。
在真核生物中，转录后的mrna必需经过一系列修饰才能形成完整的结构，即在5'端形成一个帽子结构(cap1)，3’端形成polya尾结构。这些结构与mrna的稳定、转运和翻译密切相关。
vaccinia capping enzyme(牛痘病毒加帽酶)用于给体外转录合成的mrna催化加上帽子结构(cap0)，显著改善mrna的稳定性和翻译能力，使mrna可在细胞内表达蛋白，避免核酸外切酶等的降解破坏。
mrna的帽结构是由一个7-甲基鸟苷通过一个5′–5′三磷酸酯桥连接到mrna 链的5′核苷上组成。cap-0结构由相邻的rna链通过三种酶的依次反应形成。进一步形成cap-1结构需要2-o甲基转移酶(cat. no: gmp-m072, novoprotein)参与，该修饰可以降低rna在体内引起的细胞先天免疫反应。
产品特点：
高效完成mrna加帽cap0
提高mrna的稳定性，防止被rna酶降解
提高mrna的翻译效率，提高蛋白产量
3.2、mrna加帽(cap1)
此步与3.1同时进行，在mrna的5'端加上cap0帽结构，再将cap0转化为cap1结构。
真核生物中，mrna的转录后须经系列修饰，在5'端形成一个特殊结构，即帽子结构，3’端形成polya尾结构。这些结构与mrna的稳定、转运和翻译密切相关。已知cap1结构存在于所有真核生物mrna，在稳定mrna结构和提高翻译效率方面起重要作用。研究表明，体外转录修饰得到的cap1结构mrna更不容易被免疫系统的rna感受器(rig-i)识别，因此免疫刺激更低。
mrna cap 2´-o-methyltransferas (2´-o-甲基转移酶)可利用 s-腺苷甲硫氨酸(sam)作为甲基供体， 在 rna 5´末端紧邻帽结构(cap 0)的第一个核苷酸的 2´-o 上添加甲基基团，形成带有 cap 1 结构的 mrna。cap1 结构能增强 mrna 的翻译效率，从而可提高转染后 mrna 编码的蛋白表达水平。该酶只能以带 7-甲基鸟苷帽结构(m7gpppn)的 rna 为底物，不会作用于 5´末端为pn、ppn、 pppn 或 gpppn 的 rna。带 7-甲基鸟苷帽结构(m7gpppn)的 rna 可通过 vaccinia capping system(cat. no: gmp-m062, novoprotein)来制备。
产品特点：
使mrna的cap 0帽子甲基化为 cap 1帽子
提高 rna 的翻译效率，提高蛋白产量
进一步降低免疫原性
完整mrna在细胞内表达gfp蛋白，加帽酶与帽类似物对比
3.3、mrna加尾(polya)
此步在mrna的3'端加上polya尾。
真核生物中，mrna的转录后须经系列修饰，在5'端形成一个特殊结构，即帽子结构，3’端形成polya尾结构。这些结构与mrna的稳定、转运和翻译密切相关。poly a与成熟mrna的稳定性、翻译起始以及出核运输有关，体内转录后修饰中，polya聚合酶在rna 3’-oh上逐一引入100-200个a碱基。
体外转录rna过程中，e. coli poly (a) polymerase(加尾酶) 不依赖模板的存在，可以催化 atp 以 amp 的形式依次掺入到 rna 的 3´末端，即在 rna 的 3´末端加多聚 a 尾。poly (a) 聚合酶具有很高的加尾效率，可以在 rna 的 3´末端加入 20~200 个 a 碱基。 还原体内加尾过程。
产品特点：
稳定mrna的存在形式
引导转录终止
提高rna在真核细胞中的翻译效率
4、其他相关产品
4.1、防止mrna降解
在流程2-3 mrna合成与修饰中加入rnase inhibitor，防止rna降解。
rnase inhibitor可与rnase a形成1：1复合体，对rnase 有*非竞争性抑制，保护mrna转录后不被降解
产品特点：
强抑制rnase活性
稳定性强
4.2、降解模板dna
在流程2 rna合成结束后，去除模板dna。
dnase i将单链或双链dna随机分解。
dnase i 去除rna样本种的dna残留
4.3、增加mrna产量
在流程2 rna合成过程中加入无机焦linsuan酶，增加rna产量。
无机焦linsuan酶ppase(pyrophosphatase, inorganic)可催化无机焦linsuan盐水解生成正linsuan盐(p2o7-4+h2o+ppase→2hpo4-2)，一方面可去除无机焦linsuan盐对反应体系的抑制，另一方面为反应提供热力学动力，促进产物的生成。常用于rna、dna、蛋白质的生物合成中，是一种良好的辅剂，在mrna疫苗体外大规模合成中加入可显著提高产量。
无机焦磷酸酶去除mrna合成过程中产生的焦磷酸，提高mrna产量
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