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常规人正常组织细胞培养法

1、人正常组织细胞初代消化培养法
(1)准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
(2)布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。
(3)处理组织:把组织块置于烧杯中,用hanks液漂洗2~3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。
(4)剪切:用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块,以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角烧瓶中,结扎瓶口或塞以胶塞。
(5)消化:或用恒温水浴,或置于37℃温箱消化均可,消化中每隔20分钟应摇动一次,如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。
(6)分离:在消化过程中见消化液发混浊时,可用吸管吸出少许消化液在镜下观察,如组织已分散成细胞团或单个细胞,立即终止消化,随即通过适宜不锈钢筛,滤掉尚未充分消化开的组织块。低速(500~1000转/分)离心消化液5分钟,吸出上清,加入适量含有血清的培养液。
(7)计数:用计数板计数,如细胞悬液细胞密度过大,再补加培养液调整后,分装入培养瓶中。对大多数细胞来说,ph要求在7.2~7.4范围,培养液呈微红色,如颜色偏黄,说明液体变酸,可用nahco3调整。
(8)培养:置于36.5℃温箱培养,如用co2温箱培养,瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞,纱布塞易生霉菌,每次换液时需要换新塞。
2、初代组织块培养法
(1)剪切:把组织小块置于小烧杯或青霉素小瓶中,用hanks液漂洗二三次以去掉表面血污,吸静hanks液,用眼科剪反复剪切1mm3块为止。
(2)摆布:用弯头吸管吸取若干小块,置于培养瓶中,用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底部,小块相互距离以0.5cm为宜,每一25ml培养瓶底可摆布20~30块。
(3)轻轻翻转培养瓶,另瓶底向上,注意翻瓶时勿另组织小块流动,塞好瓶塞,置36.5℃温箱培养2小时左右(勿超过4小时),使小块微干涸。
(4)培养:从微箱中取出培养瓶,开塞,46度斜持培养瓶,箱瓶底脚部轻轻注入培养液少许,然后人正常组织细胞缓缓再把培养瓶翻转过来,让培养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块。置温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后。再补加培养液。
(r)-s-(2-氨基-2-羧乙基)-l-半胱氨酸 进口、国产 英文名称: l-cystathionine 含量: br,90%
h-半胱氨酸-甘氨酸-oh 进口、国产 英文名称: cys-gly 含量: br,98%
聚赖氨酸 进口、国产 英文名称: ε-pl 含量: br,95%
α-糜蛋白酶 进口、国产 英文名称: α-chymotrypsin(bovine) 含量: usp级,1500usp u/mg
中温淀粉酶 进口、国产 英文名称: 糊精化酶 含量: br,4000u/g
高峰淀粉酶 进口、国产 英文名称: α-amylase from aspergillus oryzae 含量: 生物技术级,50u/mg
人正常组织细胞
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