复苏：
在t25培养瓶中加入0.2%明胶，摇匀后覆盖底面即可，于37℃细胞培养箱至少放置15 min以上。 吸除0.2%明胶，加入事先水浴加热至37℃的小鼠胚胎干细胞、小鼠ips细胞培养液5 ml。 将小鼠胚胎干细胞、小鼠ips细胞冻存管从液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超净台内用75%酒精擦拭冻存管旋口处及外壁，防止污染。 将冻存管内细胞悬液转移至含3-4 ml小鼠胚胎干细胞、小鼠ips细胞培养液的15 ml离心管内，以1000 rpm，离心5 min。 离心后将上清液吸除，另加入新鲜的小鼠胚胎干细胞、小鼠ips细胞培养液2 ml，吹打悬浮。 重复吹打，制成单细胞悬液，尽量避免气泡。 转移至1个已经包被过明胶的t25培养瓶中培养。 每天更换小鼠胚胎干细胞、小鼠ips细胞培养液。传代：
一般在复苏后第2-3天传代，视克隆大小和密度而定。 吸除废液。 用pbs（不含钙镁离子）轻轻冲洗一遍。 加入1.0 ml的0.25%胰酶（含edta）至培养瓶，轻轻晃动，使胰酶覆盖底面，置于37℃培养箱内消化细胞。 在显微镜下观察，直至细胞层全部脱落（一般需要1-2 min）。 加2 ml小鼠胚胎干细胞、小鼠ips细胞培养液终止消化。 多次轻轻吹打细胞，制成单细胞悬液。 加入足量的小鼠胚胎干细胞、小鼠ips细胞培养液，吹打混匀，细胞悬液分装到预先包被过0.2%明胶的t25培养瓶中。一般地，一个t25培养瓶中加入5-6 ml培养液。 放入37℃培养箱内培养。 每天换液。传代比例：1:4-1:7
冻存：
按传代的方法将细胞消化下来，制成细胞悬液。 以1000 rpm，离心5 min，弃上清，逐滴加入已经预冷的冻存液，悬浮细胞。 按每支存管内加入500 ml细胞悬液分装到冻存管内，标记细胞名称、代数、冻存日期等基本信息。 将冻存管置于程序降温盒内，-80℃过夜，转入液氮。冻存液配方：小鼠胚胎干细胞培养液或小鼠ips培养液80%，es级fbs 10%，dmso 10%