试剂盒应用
本试剂盒采用利裂解液配方,有针对性的从组织、培养细胞、拭子、血液、尿液、唾液、环境样本中获得病毒rna。裂解、提取和纯化只需10分钟。该配方中添加rna保护剂,能够抑制rna降解、保护rna完整,从而提高rna产量。提取后的rna可直接用于rt-pcr、rt-pcr、分子克隆、文库构建等实验
本试剂盒仅供研究使用,不可用于临床、食品、化妆品等域。
保存条件
室温保存一年。
自备材料
水浴锅或金属浴、无水乙醇、1.5ml无dnase无rnase离心管
使用方法
1.样本处理方法
1.1从动物组织中提取
1.1.1取20-100mg组织样本放入液氮中充分研磨,加入700ul裂解液vr,颠倒混匀。或者取20-100mg组织样本加入700ul裂解液vr,加入1颗钢珠,放入组织研磨器中,研磨1-2分钟。
1.1.2 55℃孵育1分钟。12,000rpm离心1分钟。
1.1.3 取500ul上清加入250ul无水乙醇,充分混匀。按照步骤2.1-2.7进行操作
12从中取
1.2.1悬浮细胞1.000rpm离心5分钟,收集细胞沉淀。或者贴壁细胞用胰酶消化后1,000rpm离心5分钟,收集细胞沉淀。1.2.2细胞数量<5x106个时,加入500ul裂解液vr。细胞数量为5x106~1x107个时,加入700ul裂解液vr。轻轻吹打混匀,55c孵育1分钟。
1.2.3 12,000rpm离心1分钟。
1.2.4细胞数量<5x106个时,取450ul上清。细胞数量为5x106~1x107个时,取650ul上清。
1.2.5加入0.5倍体积无水乙醇,充分混匀。按照步骤2.1-2.7操作。
1.3从血液、尿液、唾液、细胞上清液中提取1.3.1 300ul样本中加入500ul解液vr。颠倒混匀,55c孵育1分钟1.3.2加入400ul无水乙醇,上下颠倒混匀。按照步骤2.1-2.7操作。
1.4从子中提取
1.4.1拭子置于700ul裂解液vr中,颠倒混匀,55°c孵育1分钟。1.4.2加入350ul无水乙醇,上下颠倒混匀。按照步骤2.1-2.7操作
2.rna提取
2.1全部加入rna吸附柱中(如有需要可离心两次),12,000rpm离心1分钟,倒掉收集管中废液2.2向rna吸附柱中加入500ul洗涤液vri,12,000rpm离心30,倒掉收集管中废液。2.3向rna吸附柱中加入500ul洗涤液vrii,12,000rpm离心30,倒掉收集管中废液
2.4重复步骤2.3一次。
2.5 12,000rpm离心2分钟,倒掉收集管中废液。
2.6将rna吸附柱放入新1.5ml无dnase无rnase离心管中加入30-50ul洗脱液v,室温放置1分钟。2.7 12,000rpm离心2分钟,得到rna溶液,-80c保存。
注意事项
1、务必在超净台中进行操作,常换手套,防止rna降解。
2、尽可能使用新鲜样本进行rna提取。
3、使用无dnase无rnase的吸头和离心管,防止rna降解,常更换吸头,防止交叉污染。
4、为了提高洗脱效率,可提将洗脱液v置于65°c水浴后再使用。