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鹧鸪茶种质资源issr分子标记中的引物筛选(摘要)

[目的]为快速和准确地对鹧鸪茶种质材料进行issr分析提供有效引物。[方法]基因组dna的提取采用改良的ctab法:先用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测dna完整性,eb染色,以lambda dna/hindⅲ+eco rimarkers为参照,电泳结果用gel doc xr型凝胶成像分析系统下照相并记录。再用biophotometer紫外分光光度计分别测定od_(260)和od_(280),并计算出od_(260)/od_(280)值,每份样品的od_(260)/od_(280)比值均要求在1.8~2.0范围内。测定每份样品dna浓度(ng/μl),并将其稀释至20 ng/μl,分装后置-20℃保存。利用99个issr引物,对来自海南岛境内的10个居群中共20份鹧鸪茶种质材料进行pcr扩增,以筛选出适合于所有鹧鸪茶种质材料issr分析的有效引物。[结果]从99个供试引物中共筛选出15个多态性丰富、条带清晰且可重复性良好的有效引物。用筛选出的15个引物对66份鹧鸪茶种质材料进行issr-pcr扩增,均可获得带型丰富和清晰可辨的dna指纹图谱;15个引物共扩增出286条dna谱带,其中231条为多态性带,占总扩增带数的80.77%,平均每个引物扩增出19.1条谱带。[结论]所筛选的15条引物可以有效地应用于鹧鸪茶种质资源材料的issr分析。完成机构:[1]海南大学热带生物资源教育部重点实验室,海南海口570228 [2]海南大学苦丁茶研究所,海南海口570228
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