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分光光度计的显色反应

分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光源透过测试的样品后,部分光源被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
分光光度计的显色反应一般要求影响显色反应因素选择性好、灵敏度高,生成的有色化合物性质稳定,显色剂与有色物颜色反差大,显色反应要易于控制显色剂用量、反应液的酸碱度(ph)、反应温度、显色反应时间干扰离子的影响。
1、显色反应一般要求
(1)选择性好:显色剂只与一种被测组分起显色反应;
(2)灵敏度高:灵敏度高有笪微量组分的测定;
(3)有色化合物性质稳定:确保前后测定准确.
(4)显色剂与有色物颜色反差大:两者zui大吸收波长之差应大于60nm;
(5)显色反应要易于控制:结果的确保实验再现性.
2、影响显色反应的主要因素
(1)显色剂用量:通过实验来确定zui适用量;
(2)反应液的酸碱度(ph):溶液酸碱度直接影响金属离子与显色剂存在形式以及有色化合物组成的稳定性.
(3)反应温度:不同的显色反应需要不同的反应温度,一般显色反应可在室温下完成.
(4)显色反应时间:显色反应的速度有快有慢.
(5)干扰离子的影响:应采用适当方法消除其影响.
实验室分光光度计是利用分光光度法,通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性和定量分析。
不同种类的分光光度计的基本原理相似,都是利用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源。光源透过测试的样品后,部分光源被吸收,通过测量样品的吸光值,经过计算可以转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光源透过测试的样品后,部分光源被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
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