一、gst融合蛋白
gst（*转移酶）能特异的与*结合，表现为酶和底物的作用原理，利用这个原理，将gst做成标签表达出融合蛋白，与带*配基的亲和介质特异性结合，从而纯化出目标蛋白，gst融合蛋白纯化的特点有：纯度高、纯化条件温和保持蛋白活性、促进蛋白可溶性表达等。
二、gst蛋白结合效率太低
1.可能原因：上样流速太快，结合时间太短
解决方案：gst亲和层析是利用gst (glutathione-s-transferase )融合蛋白与固定的*(gsh)通过硫键共价亲和结合，gst与*的结合相对缓慢，比金属螯合亲和层析纯化his蛋白结合要缓慢很多。上样流速太快，会影响结合效率。gst亲和层析时流速适当减慢，保证足够的结合时间。
2.可能原因：缓冲液不合适，柱子平衡不到位
解决方案：gst亲和层析时缓冲液的ph应控制在6.5到8.0的之间，并保证足够的平衡体积数，让填料处于可以使用的状态，一般平衡10个柱床体积。
3.可能原因：样品中gst融合蛋白浓度太低
解决方案：因gst层析时，gst融合蛋白丰度太低时影响结合效率。对于低丰度的样品应先浓缩，在层析纯化。或者选则汇研生物的高载量gst-4ff填料。
4.可能原因：gst蛋白发生变性或聚集
解决方案：
1）胞内表达的蛋白在细胞破碎时应选则合适的破碎方式，避免蛋白碳化或者变性。
2）发生聚集可以尝试添加1-10mm的dtt，促进蛋白的溶解。
3）gst蛋白和核酸结合或者蛋白之间结合，可以适当的添加氯化钠（100-300mm)
三、gst蛋白洗脱困难
1.可能原因：洗脱强度不够
解决方案：
1）增加洗脱体积数。
2）一般使用中建议的10mm浓度对于大多数应用来说足够了，但是也存在例外。可以尝试使用50mm tris-hcl，20-40mm 还原型*，ph8.0作为洗脱缓冲液。
3）洗脱缓冲液ph过低时，应调整ph到8-9.
4）洗脱缓冲液的离子强度不宜太低，应控制在100-300mm氯化钠浓度。
2.可能原因：非特异性吸附
解决方案：洗脱缓冲液中加入1%的tritonx-100或2%的可以显著提高某些gst标签蛋白的洗脱，降低非特异性吸附和蛋白之间的吸附。
3.可能原因：洗脱缓冲液中的*被氧化了
解决方案：洗脱缓冲液需现配现用，gth务必使用时在加入缓冲液中，也可尝试加入1-5mm的dtt。
四、gst蛋白纯化后纯度太低
1.可能原因：gst融合蛋白降解
解决方案：
1）层析体系中加入蛋白酶抑制剂,防止标签蛋白降解。
2）gst标签部分脱落，检查序列，在宿主细胞表达的过程，宿主细胞代谢的酶使gst-tag和目的蛋白分开，此时可尝试换宿主细胞或者优化序列。
2.可能原因：辅助表达的蛋白被表达
解决原因：一些蛋白的表达常常需要其它蛋白辅助表达，如分子伴侣等。一些从这些共纯化的蛋白中分离gst标签蛋白的方法已经发表。如：dnak，有报道这种相互作用可以通过上样前在50mm tris-hcl，2mm atp，10mm mgso4，ph7.4中37°c温浴10分钟而破坏。或者通过atp-agarose或相似的纯化介质或进行离子交换层析来除去。
五、gst蛋白的表达
1)采用rt-pcr 扩增得到目的基因，构建到表达载体（pgex-4t-1）上； 2)用构建质粒转化表达菌bl21，lb 平板37℃；
3)lb 平板上挑取单一菌落接入5ml lb 培养基（100ug/ml amp）中，37℃培养3~5h； 4)将5ml 菌液接入1l lb（100ug/ml amp）液体培养基中，37℃培养至od600≈0.6，加入0.3mmol/l 的iptg，
5)20℃诱导16h；
6)将培养好的菌液于5000r/min 离心10min，弃去上清液，收集菌体，离心后菌体沉淀悬浮 于25ml binding buffer 中。