minutetm凝胶中蛋白/核酸提取试剂盒目录号pn-019
描述：
被动洗脱和电洗脱是从聚丙烯酰胺/琼脂糖凝胶中提取蛋白质或核酸的常用方法。被动洗脱通常需要过夜孵育，洗脱的蛋白浓度非常低，需要进一步浓缩。电洗脱（30-120分钟）比被动洗脱快但是需要特殊的电洗脱仪，对于分子量较大的（>70kd）蛋白无法高效提取，电洗脱液中通常含有表面活性剂和其他化学物质会影响下游应用。我们的试剂盒可以快速的从凝胶中提取蛋白/核酸，无需特殊仪器，操作时间<10分钟。根据凝胶染色的方法，洗脱缓冲液可以是含有表面活性剂的缓冲液或纯净水。洗脱体积在10-200ul。多个凝胶片段可以在一个单管中进行处理，可获得高浓度蛋白。
应用：
可应用于mald-ms分析，免疫动物，蛋白质相互作用和蛋白质-核酸相互作用研究等。核酸可用于pcr反应，克隆和测序等。
试剂盒组分
1.20个离心管柱及2.0ml收集管
2.20个微型离心管（200ul）
3.2g提取粉
4.4根微型杵
储存：
室温储存
所需附加材料
台式离心机
操作方法：
a.从聚丙烯酰胺凝胶中提取蛋白质
1.蛋白样品通过sds-page或2d分离后，凝胶可以通过正染色法如标准的考马斯亮蓝染色或者负染色法（见下面参考文献）将凝胶去染色显示目标蛋白条带。如果凝胶用考马斯亮蓝染色，需确保凝胶仅简单染色（使用最短时间显示目标条带，通常不超过5分钟），并且需要用双蒸水至少冲洗3次。
2.用刀片从胶中切出感兴趣的条带，并修剪掉过多的凝胶。用滤纸去除凝胶中多余的液体。将1-2个凝胶切片放入提供的200ul管底（该管可以容纳多个凝胶切片）3.用微型杵平端添加适量提取粉（约凝胶体积的1/4-1/3）到管底。根据需要添加洗脱缓冲液（见下文）到同一管中（20ul/胶片）。将微型杵端插入管底反复扭转减小凝胶体积使其匀浆。你也可以用微型杵反复挤压凝胶使其匀浆（大约需要1-2分钟，微型杵是可重复使用，简单地用蒸馏水冲洗，用纸巾擦干）。继续加入按照20-50ul/切片洗脱缓冲液到管中，确保洗脱缓冲液可以没过凝胶匀浆。盖上管子，在pcr仪中，94℃孵育5-10分钟。涡旋震荡几下，继续孵育5-10
分钟。延长孵育时间会增加蛋白产量。也可以盖上盖子4℃过夜孵育。
4.打开200ul离心管和接收管管盖，用刀片或剪刀将盖子全部修剪掉，将离心管柱套入接收管后，将200ul离心管开口向下插入离心管柱套管中，离心机最高转速离心2分钟。弃掉离心管柱，保存接收管中洗脱的蛋白即可。
b．琼脂糖凝胶中的核酸提取
1.用刀片切出感兴趣的条带并修剪掉过多的凝胶。
2.将切下的胶片放入提供的200ul管中。加入加适量提取粉（约凝胶体积的1/4-1/3，见上面）到
管底。
3.用微型杵扭转研磨胶片减少体积使其匀浆如上述。用刀片或剪刀将200ul离心管和接收管盖子
全部修剪掉。将200ul离心管开口向下插入离心管柱套管中，离心机最高转速离心1分钟。弃掉离心管柱，保存接收管中洗脱的核酸即可。
洗脱缓冲液的选择
洗脱缓冲液的选择取决于凝胶染色的方法以及下游的应用。如果染液中含有固定剂，如甲醇和乙酸。推荐使用含0.1-0.5%sds或酸不稳定的表面活性剂的洗脱缓冲液。如果凝胶不染色或负染色，蛋白可以用双蒸水或含有甲酸/水/异丙醇洗脱缓冲液（1:3:2v/v/v
关键词：台式离心机 离心机