冻存的细胞该如何开始培养?
(1) 将一管细胞从液氮罐中取出,注意保护手和眼睛。
(2) 用10秒钟时间将小管的盖子拧松1/4以去除残留在螺纹处的液氮,然后将盖子盖紧。
(3) 将小管放入37℃水浴中,轻轻握住并旋转,直到管内物体*融化。
(4) 将小管立即从水浴中拿出,擦干,转入无菌环境。
(5) 用70%的酒精冲洗小管,然后擦去多余酒精。
(6) 打开盖子,注意手指不要碰到里面的螺纹。用1ml离心管离心内容物。
(7)平衡管内物,用多聚赖氨酸包被培养瓶(多数细胞用t-75的培养瓶)。多数细胞类型推荐接种密度为每平方厘米5000细胞。
(8) 盖好盖子,轻轻摇晃培养瓶以使细胞分布均匀。若需要气体交换可打开盖子。
(9) 将培养瓶放放培养箱中(37℃,5%co2,95%空气)
(10) 植入培养后第6-16小时更换一次培养基以去除残留的二甲基亚枫和未贴壁的细胞。