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内切酶EcoRI, 无动物源性使用方法

内切酶ecori,无动物源性背景:
经过基因工程改造的ecori,adcf,能够在5~15分钟内消化dna。它可用于鉴定质粒dna、pcr产物和基因组。ecori,adcf具有以下特点:在5到15分钟内快速消化,极-好的酶活性冗余,易于处理底物过量或具有挑战性的模板消化。这种酶不含动物来源的成分
艾美捷内切酶ecori,无动物源性:
cat #: c-bsm2504s
size: 5000 u
storage: -20°c
内切酶ecori,无动物源性组成:
单位定义:
一个单位定义为在37°c、50µl推荐反应缓冲液中1小时内消化1µgλdna所需的ecori量
热灭活
在80°c下培养20分钟。
质量控制
净化
sds-page检测结果大于95%。
核酸内切酶残基
将20u的ecori与超螺旋质粒dna在37°c下孵育4小时,dna电泳中未检测到质粒的变化。
蓝/白筛选试验:
用1μl ecori消化含有locza基因的合适载体。将消化产物连接并转化到大肠杆菌感受态细胞中。在含有x-gal、iptg和适当抗生素的luria bertani培养板上,成功门控的β-半乳糖苷酶基因可以表达并产生蓝色菌落,而中断的基因(即降解的dna末端)产生白色菌落。adcf限制性内切酶必须产生少于1%的白色菌落。
dna酶残基
将20u的ecori与双链dna在37°c下孵育16h,dna电泳未检测到dna的变化。
rnase残基
将20u的ecori与rna在37℃下孵育1小时,电泳中未检测到rna降解
结扎和清算
在最佳反应温度下用20u的ecori消化后,dna片段可以在22°c下与t4 dna连接酶(fast)连接。在这些连接的片段中,通过琼脂糖凝胶电泳测定,大多数片段可以用ecorl重新切割。
宿主dna残基:
通过对大肠杆菌16s rdna特异性的taqman-qpcr检测酶溶液中的核酸残基,检测到少于10pg的大肠杆菌基因组残基。
宿主蛋白残留:
通过elisa测定大肠杆菌宿主蛋白低于50ppm。
无菌:
未检测到大肠杆菌。
内毒素残留量:
<10 eu/mg
其它类似信息

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