弯曲菌是一种常见的导致人类肠炎的致病菌,以腹泻为主要特征,并可从粪便中分离出来。它污染食物和水,夏季是传染高峰。
弯曲菌为革兰阴性,螺旋形弯曲,有动力;培养时需3~15%氧,为微需氧菌;氧化酶阳性,还可还原性硝酸盐。iso于2017年发布了新版的iso10272-1:2017标准,即《食品链的微生物学,弯曲菌属检测和计数的水平方法》,它取代的是旧版iso 10272-1:2006。具体改变主要是:
1. 包括了二次增菌肉汤(preston肉汤),主要为了克服背景菌对第三代-内酰胺类抗生素如*的耐药;
2. 增加了直接在mccda上的接种步骤;
3. 验证试验删掉了微需氧生长,只规定了25℃需氧生长;
该iso适用于食品、饲料和环境样品。
iso10272-1:2017建议的弯曲菌检测方案,依据样本类型和检测目的,分为三种:1)在弯曲菌多的时候,不需要增菌,用方案c;2)对于弯曲菌和背景菌都较少的情况,用方案a,例如烹制过的或低温食品。取样后再bolton肉汤微需氧37℃先培养4-6h,再41.5℃培养44h±4h;3)对于弯曲菌少,背景菌多的情况,例如生肉、生乳,采用方案b,在preston肉汤中微需氧41.5℃培养24h±2h。
增菌后,方案a是采用mccd琼脂和另一款其选择剂不同于mccd的弯曲菌选择分离培养基来分离,方案b是采用mccd琼脂来分离。均为微需氧41.5℃培养44h±4h。在mccd琼脂上弯曲菌典型菌落为灰色。对于iso10272-1:2017中方案a所提到的另一款其选择剂不同于mccd的弯曲菌选择分离培养基,可选择himedia公司生产的hicrome弯曲菌显色培养基(货号m2020,配合弯曲菌选择性添加剂(货号fd178)一起使用)。该显色培养基含有复合蛋白胨、氯化钠、多种显色剂、生长因子和琼脂。适用于食品样本和临床样本。培养基配好为在平皿中为黄色透明至轻微不透明凝胶。35-37℃孵育24-48小时后,弯曲菌菌落为淡紫色(下图),而金葡菌和大肠埃希菌均被抑制。
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