western免疫印迹（western blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。主要试剂:1、丙烯酰胺和n，n’-亚甲双丙烯酰胺，应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)n，n’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，n，n-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加h2o至100ml。)储于棕色瓶，4℃避光保存。严格核实ph不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。2、十二烷基硫酸钠sds溶液:10%(w/v)0.1gsds，1mlh2o去离子水配制，室温保存。3、分离胶缓冲液:1.5mmol/ltris-hcl(ph8.8):18.15gtris和48ml1mol/lhcl混合，加水稀释到100ml终体积。过滤后40c保存。4、浓缩胶缓冲液:0.5mmol/ltris-hcl(ph6.8):6.05gtris溶于40mlh2o中，用约48ml 1mol/l hcl调至ph6.8加水稀释到100ml终体积。过滤后40c保存。这两种缓冲液必须使用tris碱制备，再用hcl调节ph值，而不用tris.cl。5、temed原溶液n，n，n’n’四甲基乙二胺催化过硫酸铵形成自由基而加速两种丙稀酰胺的聚合。ph太低时，聚合反应受到抑制。10%(w/v)过硫酸胺溶液。提供两种丙稀酰胺聚合所必须的自由基。去离子水配制数ml，临用前配制.6、sds-page加样缓冲液:ph6.8 0.5mol/l tris缓冲液8ml，甘油6.4ml，10%sds 12.8ml，巯基乙醇3.2ml，0.05%溴酚蓝1.6ml，h2o 32ml混匀备用。按1:1或1:2比例与蛋白质样品混合，在沸水终煮3min混匀后再上样，一般为20-25ul，总蛋白量100μg。7、tris-甘an酸电泳缓冲液:30.3gtris，188g甘an酸，10gsds，用蒸馏水溶解至1000ml，得0.25mol/l tris-1.92mol/l甘an酸电极缓冲液。临用前稀释10倍。8、转移缓冲液：配制1l转移缓冲液，需称取2.9g甘an酸、5.8gtris碱、0.37g sds，并加入200ml甲醇，加水至总量1l。9、丽春红染液储存液：丽春红s 2g 三氯yi酸30g 磺基水杨酸 30g 加水至100ml 用时上述储存液稀释10倍即成丽春红s使用液。使用后应予以废弃。10、脱脂奶粉5%(w/v)。11、nan3 0.02% 叠氮钠(有毒，戴手套操作)，溶于磷酸缓冲盐溶液(pbs)。12、tris缓冲盐溶液(tbs):20mmol/ltris/hcl(ph7.5)，500mmol/lnacl。13、tween20(15)鼠抗人-mmp-9(16)鼠抗人-timp-1。14、过氧化物酶标记的第二抗体。15、nbt(溶于70%二甲基甲酰胺，75mg/ml)。16、bcip(溶于100%二甲基甲酰胺，50mg/ml)。17、100mmol/ltris-hcl(ph9.5)。18、100mmol/l nacl。19、50mmol/ltris-hcl(ph7.5)，5mmol/l edta。