我们接着这个话题，通过一篇美国俄勒冈州立大学药学院的研究论文，进一步讨论缓冲体系对mrna-lnp的影响，供大家参考。该研究测试了三种常见生物缓冲液——hepes、tris和pbs——在单次冻融前后与dlin-mc3-dma mrna-lnp制剂的相容性。通过电子显微镜、差示扫描量热法和膜流动性分析发现，不同缓冲液使lnp形态发生了不同的结构变化。采用体外和体内模型测量mrna转染效率，发现tris或hepes缓冲液中的lnps具有更好的冷冻保护效果以及与pbs相比更高的转染效率。
试验结果：
脂质纳米颗粒（lnp）通常通过透析或与生理缓冲液(如pbs)交换缓冲液来中和，纯化后可直接注射入生物体。此外，缓冲体系可以作为冷冻保护剂，减轻lnp制剂在低温储存时的稳定性问题。
值得注意的是，fda批准的c*v*d-19疫苗spikevax和comirnaty使用不同的缓冲液，这表明不同的mrna-lnp制剂可能对缓冲体系有不同的要求。（笔者注：comirnaty上市后制剂处方中缓冲体系由pbs变更为了tris，详细信息请参考：《moderna：使用tris缓冲体系可提高mrna稳定性》）
因此，为lnp制剂筛选适宜的缓冲体系是一个ji具价值的研究课题。然而，缓冲体系对lnp的结构形态、包封率和转染效率方面的作用迄今尚未得到充分研究。
分享的研究中，使用常用阳离子脂质dlin-mc3-dma制备mrna-lnp，在-20℃低温冷冻3周，比较了lnp冻存前后的理化性质和生物学活性（体外+体内）。
结果表明，通过体外和体内转染衡量，在hepes和tris体系中的lnps总体上优于pbs。与pbs相比，hepes和tris作为冷冻保护剂，可以在更大程度上保存lnps的结构和mrna的递送效率。
此外，储存在hepes中的lnps在ft循环后形成了du特的沙漏状结构，而tris和pbs在冻融后都产生了高度聚集的结构。因此，hepes可以为lnps提供更好的保护，防止ph梯度急剧下降，防止lnp聚集，最终控制相分离过程。另一方面，使用tris对转染特别有益，这表明缓冲盐等辅料在lnp制剂中的作用可能被大大低估了。
通过分享该研究，艾伟拓产品团队希望揭示lnp制剂处方研发过程中，缓冲体系选择的重要性，希望能够为广大核酸递送企业及相关从业者带来一定的参考。
未来，艾伟拓产品团队也会持续关注核酸递送制剂处方相关研究进展，包括不同剂型（如冻干剂型）、不同存储条件（如2~8℃冷藏存储）、不同lnp脂质组分及不同载荷等因素对lnp制剂辅料选择的影响。
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