植物过氧化物酶(pod)检测试剂盒(愈创木酚微板法)的注意事项
产品简介：
过氧化物酶(peroxisome，pod)是以过氧化氢为电子受体催化底物氧化的酶，主要存在于细胞的过氧化物酶体中，以铁卟啉为辅基，可催化过氧化氢，氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用，该酶属于细胞木质素合成途径中间的关键酶，研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理，为减少水果石细胞含量提高其品质提供依据。植物过氧化物酶(pod)检测试剂盒(愈创木酚微板法)检测原理是以愈创木酚(又称 2-甲氧基酚)作为底物，在酶促反应的最适条件下采用每隔一定时间测定产物生成量的方法，于酶标仪 470nm 处测定吸光度，以吸光度变化所需酶量进行计算，主要用于植物组织的裂解液或匀浆液、血清等样品中内源性的过氧化物酶活性，尤其适用于测定水果中过氧化物酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
自备材料：
1、蒸馏水
2、研钵或匀浆器
3、离心管
4、低温离心机
5、水浴锅或恒温箱
6、96 孔板、酶标仪
操作步骤(仅供参考)：
1、准备样品：
①植物样品：取 0.5-1.0g 植物组织或水果中层果肉加入 4ml 预冷的 pod lysis buffer
研磨或匀浆，4℃ 10000g 离心 15~20min，留取上清液，即为 pod 粗提液，-20℃冻
存，用于过氧化物酶的测定。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于该试剂盒的测定，-20℃冻存，用于过氧化物酶的测定。
③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用 pod lysis buffer 进行适当匀浆，4℃ 10000g 离心 15~20min，留取上清液，即为 pod 粗提液，-20℃冻存，用于过氧化物酶的测定。
④高活性样品：如果样品中含有较高活性的过氧化物酶，可以使用 pod lysis buffer 进行恰当的稀释。
2、配制 pod assay buffer 工作液：取适量的 pod 氧化剂和 pod assay buffer，按 pod氧化剂：pod assay buffer=1：14 混合，即为 pod assay buffer 工作液，即配即用，不宜久置。
3、pod 加样：取 96 孔板，按照下表设置对照孔孔、测定孔，注意：对照孔、测定孔中为同一待测样品，但对照孔中是提前加热煮沸 5min 的样品；溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡，如果样品中的 pod 活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置 2 平行孔，求平均值。
4、pod 测定：立即以酶标仪，以对照孔为对照，测定 470nm 处测定孔的吸光度(a测定0)；
37℃准确孵育 3min 后，立即加入 5μl pod 终止液终止反应(备选方案)，以对照孔为对
照，以酶标仪测定470nm 处测定孔的吸光度(a测定1)。注意：加入 pod 终止液终止反
应不是必须步骤，可37℃准确孵育 3min 后，以对照孔为对照，直接以酶标仪测470nm 处测定孔的吸光度(a测定1)。
计算：
pod 活性单位的定义：在该实验条件下，每 1min 吸光度变化 0.01 所需酶量为一个活
性单位。
组织样本pod(u)={(a测定1-a测定0)×vt}/(w×vs×0.01×t)
式中：a测定1=孵育 3min 后测定孔的吸光度值
a测定0=加入 pod assay buffer 工作液后测定孔的吸光度值
w=组织样本的重量(g)
vt=提取酶液的总体积(ml)
vs=测定时所用酶液体积(ml)
t=反应时间
液体样本pod(u)=(a测定1-a测定0)/(0.01×t)
式中：a测定1=孵育 3min 后测定孔的吸光度值
a测定0=加入 pod assay buffer 工作液后立即测定的测定孔吸光度值
t=反应时间
注意事项：
1、 待测样品中不能含有酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
2、 pod 酶液提取时，注意低温操作，防止酶活性。
3、 以煮沸的酶液为对照时，酶要充分失活。
4、 pod 氧化剂和 pod 终止液具有一定腐蚀性，请小心操作。
5、 pod 氧化剂易挥发，请密闭保存，否则检测效率下降。
6、 如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，每次检测指标不宜过多，否则操作时间不一，有可能导致样本间的差异。
7、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6 个月有效；常温运输，4℃保存。
植物过氧化物酶(pod)检测试剂盒(愈创木酚微板法)的注意事项
关键词：水浴锅 酶标仪 离心机 恒温箱 分光光度计