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2017年版ISO 22964克罗诺杆菌属检测标准解读

阪崎克罗诺杆菌名称经历了数次变化。早因产生黄色素,被称为黄色阴沟肠杆菌。后来发现该菌与阴沟肠杆菌有所不同,又更名为“阪崎肠杆菌”。2008年,iversen等人通过分子生物学技术(如多位点序列分型即mlst)鉴定,将该菌扩大为属(克罗诺杆菌属)。目前,克罗诺杆菌至少有7个种。其中阪崎克罗诺杆菌与人的关系为密切。
克罗诺杆菌耐干燥环境,可在婴幼儿奶粉、豆粉、营养粉、草本茶、淀粉中存活,在海水中也存在。有报道,在海产干制品中的检出率可达17.83%。又有人在成都市某城区超市、农贸市场、食品小吃店中调查,发现100份食品样品中有32份样品分离出克罗诺杆菌,分离率为32%。
克罗诺杆菌耐高温,耐紫外线,能产生生物膜对消毒产生抵抗。同时,阪崎克罗诺杆菌对婴幼儿的感染致死率高,因此,在婴幼儿食品和乳品中进行检测非常重要,我国食品安全标准在这方面也有规定。
iso/ts 22964:2017是上发布的一版克罗诺杆菌属检测标准,它取代了2006年版。主要变动是:将检测范围从阪崎克罗诺杆菌扩大至整个克罗诺杆菌属,样本包括人类食品、动物饲料和食品生产区的环境样本;mlst肉汤被克罗诺杆菌选择性肉汤(csb)所取代;阪崎肠杆菌分离琼脂被克罗诺杆菌分离显色琼脂(cci)所取代;生化验证试验有修正。
iso/ts 22964:2017制订的克罗诺杆菌属检测过程大致为:1. 预增菌。取样,在缓冲蛋白胨水(bpw)中34℃-38℃培养18h±2h;2. 增菌。转移0.1ml预增菌液至10ml csb,混匀。41.5℃培养24h±2h。3.接种。用接种环接种10ul菌液至克罗诺杆菌显色培养基(cci)平板上,41.5℃培养24h±2h。4.挑出典型菌落,在tsa上纯培养并进行生化验证。
cci平板上典型的克罗诺菌落为小至中等大小(1mm~3mm)蓝色或蓝绿色菌落。非克罗诺菌落则为白色,或白色同时中心为绿色或灰色、黑色。有些非克罗诺菌为黄色或红色。
常见的生化验证包括氧化酶、赖氨酸脱羧、*脱羧、四种糖发酵产酸(阿拉伯糖、*、蔗糖)、
4-硝基苯--d-葡吡喃糖苷的水解。其他如伏普、甲基红试验等为可选。克罗诺杆菌属为氧化酶反应阴性,葡吡喃糖苷的水解和蔗糖发酵产酸阳性,而赖氨酸脱羧和*产酸均为阴性。
关于克罗诺杆菌选择性肉汤(csb),微生物产品供应商himedia公司提供有商品化脱水培养基cronobacter screening broth(货号m1786),1升中加入1管*(货号fd233)制备为*培养基。himedia公司也提供有克罗诺杆菌显色培养基(cci),其组成和iso/ts 22964:2017*一致,货号为m2062i。同时,himedia公司也提供有4-硝基苯--d-葡吡喃糖苷,货号为rm10294-1g,欢迎选购。
图. 克罗诺杆菌显色培养基(cci, 货号为m2062i)
在iso/ts 22964:2017的附录3中,还列表列举了阪崎克罗诺杆菌与其他相似菌的鉴别特征。表中的数字代表者阳性菌株的比例。其中阪崎克罗诺杆菌与阴沟肠杆菌的区别在于:4-硝基苯--d-葡吡喃糖苷水解试验,阪崎克罗诺杆菌(+),阴沟肠杆菌(基本-);*发酵,阪崎克罗诺杆菌(-),而阴沟肠杆菌(+),可供检测人员参考。
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