昆虫细胞无血清悬浮生长培养基--这种产品是无血清的、完-全悬浮的细胞培养基，适用于各种细胞系，支持高密度细胞生长。它具有两倍的时间、高活力和与广泛的细胞类型兼容的特点。当与bac到bac昆虫细胞表达系统结合使用时，它可以在hifive和sf9昆虫细胞中高效和稳定地表达多种蛋白质。与bac和sf9细菌杆状病毒表达系统结合，可以有效和稳定地在hifivea和sf9害虫细胞中表达多种蛋白质。
艾美捷昆虫细胞无血清悬浮生长培养基基本参数：
货号：a-exo005
规格：500ml, 1000ml
保存条件: 4℃避光保存；保质期12个月。
昆虫细胞无血清悬浮生长培养基使用方法：
昆虫悬浮细胞培养环境
细胞培养条件：温度曲线：27℃±0.5℃、湿度曲线：70%±20%、无需co2、120rpm（振幅：25）。培养过
程中需注意以下三点：
1） 保证摇床24小时正常运转；
2） 防止外界环境温度过高，导致培养箱内温度失控；
3） 防止培养箱内水盘缺水，导致培养箱内湿度过低。
培养基适应
1.直接适应：最初培养阶段，hi five细胞按初始密度0.5×10
6 cells/ml接种，sf9细胞按初始密度1.0×10
6
cells/ml接种，直接将培养基更换为昆虫细胞无血清悬浮生长培养基(a-exo005)进行培养。待细胞培养2-3
代，且生长稳定后进行后续实验。hi five细胞稳定生长时按0.5×106cells/ml密度接种，sf9细胞稳定生长时按1.0×106cells/ml密度接种，培养72h后均可达到5-7×106cells/ml，细胞活率≥90%。
2.间接适应：a-exo005培养基与细胞原培养基1：1混合培养细胞，连续传2-3代，细胞稳定生长后可将培
养基更换为a-exo005培养基，再传2-3代，细胞生长稳定后进行后续实验。hi five细胞稳定生长时按0.5×106cells/ml密度接种，sf9细胞稳定生长时按1.0×106cells/ml密度接种，培养72h后均可达到5-7×106cells/ml，细胞活率≥90%。
3.注意事项：
3.1.根据细胞具体情况选择进行培养基直接适应或者间接适应。
3.2细胞驯化初期，若出现密度低、结团等不稳定状态，根据密度选择合适的传代方式。
a.稀释传代：根据细胞密度计算传代时所需细胞悬液，去除多余细胞悬液并补加新鲜培养基。
b.离心传代：根据细胞密度计算传代时所需细胞悬液，800rpm（114g）离心5min，去除上清，用新鲜
培养基重悬细胞。
4.细胞正常状态传代：
昆虫悬浮细胞复苏：
1.预热培养基：取20ml的对应培养基置于27℃预热，保证预热充分。
2.将冻存管从液氮罐或-80℃冰箱中取出，迅速转移至37℃水浴中，快速摇晃，直至完-全融化。
3.取预热好的培养基5ml于无菌离心管中，并将解冻后的细胞悬液移入此离心管中。800rpm离心5min（除去冻存液中dmso）。
4.离心后弃去上清，用15ml预热好的培养基（保证较高细胞密度）重悬细胞，移至相应摇瓶，放于培养箱中
悬浮培养。
昆虫悬浮细胞传代：
1. hi five细胞复苏初期传代：
细胞复苏后前两代，如果细胞密度＞2×106cells/ml，取部分细胞悬液离心传代，按初始密度0.8×106cells/ml
接种；如果细胞密度≤2×106cells/ml，进行全部离心换液（细胞刚复苏会有细胞碎片，属正常现象）。
2. sf9细胞复苏初期传代：
复苏后2-3天取样计数，若细胞密度＜2×106cells/ml以下，细胞不做任何处理，继续培养2-3天（复苏后4-6天），取样计数，若细胞密度2-5×106cells/ml，直接向摇瓶中加入新鲜培养基将细胞密度调整至1×106cells/ml左右，切忌不要离心传代，继续培养，若细胞密度＞5×106cells/ml，可正常稀释传代。
3. hi five活细胞初期传代：
收到细胞后，将细胞转移至摇瓶中，取样计数并查看细胞状态，如果细胞密度＞2×106cells/ml，可以稀释传代，按0.8×106cells/ml接种；如果细胞密度≤2×106cells/ml，建议全部离心传代。（细胞经历运输过程会有细胞碎片，属正常现象）。
4. sf9活细胞初期传代：
收到细胞后，将细胞转移至摇瓶中，取样计数并查看细胞状态，如果细胞密度≥5×106cells/ml，可以稀释传代，按2×106cells/ml接种；如果细胞密度＜5×106cells/ml，继续培养1-4天，此期间需每24h取样计数查看细胞状态，当细胞密度≥5×106cells/ml，按2×106cells/ml接种，稀释传代，直至细胞恢复正常状态后，按1×106cells/ml接种。（细胞经历运输过程会有细胞碎片，属正常现象）。
昆虫悬浮细胞冻存：
1.待细胞恢复至正常状态后，扩大细胞培养体积准备冻存建库。尽量多建细胞库，保证备份充足。
2.含血清冻存：选择处于对数生长期、活率＞90%细胞进行冻存，冻存细胞密度：15-20×106cells/ml，推荐20×106cells/ml。
无血清冻存：选择处于对数生长期、活率＞90%细胞进行冻存，冻存细胞密度：30-40×106cells/ml，推荐40×106cells/ml。
3.准备冻存盒：向程序降温盒注入适量异丙醇，置于4℃冰箱预冷。
4.含血清细胞冻存液配制：冻存液=40%新鲜培养基+50%fbs（建议使用进口胎牛血清）+10%dmso，冻存液配好后置于4℃冰箱预冷。
无血清细胞冻存液配制：冻存液=45%新鲜培养基+45%细胞培养上清+10%dmso，冻存液配好后置于4℃冰箱预冷。
冻存液配制时，先加培养基再加血清或dmso，防止dmso浓度过高导致血清有效成分变性。
5.取细胞悬液，800rpm离心5min，弃去上清，用适量细胞冻存液重悬细胞，调整细胞密度至目标值。
6.快速分装细胞液至冻存管中。
7.将冻存管放入程序降温盒中，放于-80℃冰箱，24h后转至液氮罐中储存。一段时间后复苏检测。
该试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。