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PCR反应基本步骤构成

聚合酶链反应技术(polymerase chain raction ,pcr)是一种在体外扩增特定dna片段的方法,具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点,可用很短时间使目的基因或某一片段扩增十万乃至几百万倍。
pcr技术的基本原理类似于dna的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。pcr由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成:
1、模板dna的变性:
模板dna经加热至93℃左右一定时间后,使模板dna双链或经pcr扩增形成的双链dna解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;
2、模板dna与引物的退火(复性):
模板dna经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板dna单链的互补序列配对结合;
3、引物的延伸:
dna模板-引物结合物在72℃、dna聚合酶(如taqdna聚合酶)的作用下,以dntp为反应原料,靶序列为模板,按碱基互补配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板dna链互补的半保留复制链。
重复循环变性-退火-延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
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