应用简介
本实验采用固相萃取结合高效液相色谱串联荧光检测器（spe-hplc) 的方法，建立了香油中苯并芘残留量的检测方法。香油经正己烷溶解，cleanert silica和cleanert bap-3固相萃取柱净化，venusil asb c18色谱柱（4.6 × 250 mm，5 μm，150 å）分离，水和乙腈为流动相进行等度洗脱，外标法进行定量。结果表明，苯并芘添加量为0.1 mg/kg时，回收率在80% ~ 100%之间，能够满足检测要求。——应用编号：af10098
苯并芘又称苯并（α）芘，英文缩写bap，是一种常见的高活性间接致癌物和突变原。bap存在于煤焦油、各类炭黑和煤、及焦化、炼油，沥青、塑料等工业污水中。肉和鱼中的bap含量取决于烹调方法，水果、蔬菜和粮食中的bap含量取决其来源。主要来自洗刷大气的雨水水中的bap以吸附于某些颗粒上、溶解于水中和呈胶体状态等三种形式存在，其中大部分吸附在颗粒物质上。bap被认为是高活性致癌剂，但并非直接致癌物，必须经细胞微粒体中的混合功能氧化酶激活才具有致癌性。bap不仅广泛存在于环境中，而且与其它多环芳烃的含量不一定的相关性，*生活在含bap的空气环境中会造成慢性中毒。许多的动物实验证明，bap具有致癌、致畸、致突变性。危险特性，遇明火、高热可燃。受高热分解放出有毒的气体因此通过有效的实验技术手段，对香油中的有关苯并芘残留进行监控，以确保消费者对食品消费的安全具有重要意义。
本实验通过优化前处理方法建立了苯并芘在香油中的高效液相色谱方法。
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
高效液相色谱仪（配荧光检测器）
试剂材料
正己烷、二氯甲烷、乙腈均为色谱纯；实验用水为超纯水；苯并芘标准品（纯度99%）；一次性*；针式过滤器ptfe(0.22 μm，直径13 mm)；
cleanert silica固相萃取柱柱：500 mg/6 ml（货号：si5006）；cleanert bap-3固相萃取柱柱：500 mg/6 ml （货号：bap5006）
样品制备
样品处理
称取香油0.5 g，置于12 ml样品瓶中，加入3 ml正己烷，涡旋震荡溶解，作为待净化液。
样品净化
取cleanert bap-3萃取柱(500 mg/6 ml)，需在柱上串联一只cleanert silica固相萃取柱，依次用5 ml二氯甲烷，5 ml正己烷活化小柱；将上述待净化液上样到小柱上，然后用2 ml正己烷润洗样品瓶，将润洗液也上样到柱上，先用5 ml正己烷淋洗串联柱，待溶液*滴至cleanert bap-3上，将silica硅胶柱弃去，再用5 ml正己烷淋洗cleanert bap-3柱，弃去淋洗液；后用5 ml二氯甲烷洗脱，收集；40℃氮气吹干洗脱液，用1 ml乙腈溶解定容，超声10 s，过0.22 μm ptfe滤膜后进hplc检测。
实验条件：液相条件
色谱柱：venusil asb c18，5 μm，150 å，4.6 × 250 mm
流动相：水︰乙腈= 12︰88
柱 温：30℃
进样量：20 μl
流 速：1.0 ml/min
发射波长：406 nm；激发波长：384 nm
结果与讨论
由表1可知，采用固相萃取结合高效液相色谱法检测苯并芘的加标回收率在80% ~100%之间，cv值小于10%，能够满足检测要求。由图可看出经cleanert silica串联cleanert bap-3柱净化，采用venusil asb c18色谱柱检测得到的苯并芘峰形良好，且保留时间稳定。
实验结果
表1. 香油中苯并芘实验结果
物质名称
加标量/(mg/kg)
平均回收率/%
cv/%
rt/min
苯并芘
0.1
90.2
2.2
8.41
结论
本实验建立了香油中苯并芘残留量的前处理方法，并结合高效液相色谱对香油中苯并芘的残留量进行了测定。对于加标量为0.1 mg/kg的样品进行了检测，回收率在80% ~ 100%之间，符合要求。
附：相关产品
产品名称
规格描述
包装数量
订货号
venusil asb c18
5µm，150å，4.6×250mm
1支
vs952505-0
cleanert bap-3
500mg/6ml
30支/pk
bap5006
cleanert silica
500mg/6ml
30支/包
si5006
保护柱套
适用于4.6*10mm和2.1*10mm
1支
sh-100
直联式保护柱芯
5µm，150å；4.6*10mm
4支/包
vs950105-0s
1.5 ml样品瓶
短螺纹透明带书写处 32*11.6mm
100/pk
1109-0519
1.5 ml样品瓶盖
9mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫 45°shore a; 1.0mm
100/pk
0915-1819
针式过滤器ptfe
单膜，13mm，0.22µm
100个/包
as041320-t
一次性注射器
2 ml无针头
100支/包
lzsq-2ml
正己烷
4 l/瓶，色谱纯
4×4 l/箱
ah216-4
二氯甲烷
4 l/瓶，色谱纯
4×4 l/箱
ah300-4
乙腈
4 l/瓶，色谱纯
4×4 l/箱
ah015-4
spe-m08正压型多功能固相萃取装置
8 通道
1 台
spe-m08
15位氮吹仪
15位
1 台
nv15-m