2020年《食品安全监督抽检实施细则》(简称国抽)与2019年相比，在茶叶的检验项目中，删除了除虫脲、多菌灵、甲氰菊酯、滴滴涕和特丁硫磷的检测，新增了内吸磷、乙酰甲胺磷、丙溴磷、毒死蜱和莠去津的检验项目。
迪马科技按照2020年版国抽细则的要求，参考《gb 23200.13-2016 食品安全标准 茶叶中448种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-质谱法》、《gb/t 23204-2008 茶叶中519种农药及相关化学品残留量的测定 气相色谱-质谱法》、《gb 23200.113-2018 食品安全标准 植物源性食品中208种农药及其代谢物残留量的测定 气相色谱-质谱联用法》、《sn/t 4655-2016 出口食品中草甘膦及其代谢物残留量的测定方法 液相色谱-质谱/质谱法》等相关标准，采用spe、quechers结合gc-ms、uplc-ms/ms建立了一系列茶叶中农药残留的检测方法，系列方法中涵盖了所有2020版国抽细则中茶叶检验项目下的农药，可供广大分析工作者参考！
方法一 spe-uplc-ms/ms法
1、适用范围
本方法适用于茶叶中的克百威、灭多威、3-羟基克百威、茚虫威、甲胺磷、氧乐果、啶虫脒、吡蚜酮、吡虫啉和内吸磷(o+s)的检测。
2、标准品配制
(1) 单标储备液1.0 mg/ml: 准确称取适量各标准品，用乙腈配制成1.0 mg/ml的单标储备液；
(2) 混标储备液5.0 μg/ml: 分别吸取各单标储备液，用乙腈配制成5.0 μg/ml混标储备液；
(3) 混标中间液1.0 μg/ml: 吸取混标储备液，用乙腈配制成1.0 μg/ml混标储备液。
3、提取
(1) 取10.0 g样品，加入30 ml乙腈，振荡5 min，6000 rpm离心5 min，取出上清液；
(2) 向下层残渣中继续加入30 ml、20 ml乙腈，按照步骤(1)重复提取两次；
(3) 合并三次提取液，在40 ℃水浴中减压蒸至1 ml，加入乙腈复溶，并转移到具塞试管中定容至5 ml，取出1 ml，待净化。
4、净化——proelut tpc 12 ml (cat.# 65354)
(1)活 化:
加入10 ml乙腈-甲苯(3-1)活化，弃去流出液；
(2)上 样:
加入1 ml待净化液，收集流出液；
(3)洗 脱:
加入25 ml乙腈-甲苯(3-1)，收集流出液，合并(2)和(3)流出液；
(4)重新溶解:
将流出液在40 ℃水浴中旋转浓缩至约0.5 ml，然后在室温下用氮气缓慢吹干，加1 ml甲醇溶解，上机分析。
注: 同方法制备基质匹配标准溶液
5、分析条件
uplc 条件
色谱柱: leapsil c18，100 x 2.1 mm，2.7 μm (cat#: 86005)
流 速: 0.4 ml/min 进样量: 1 μl 柱 温: 35 ℃
流动相: a: 0.1%甲酸水b: 乙腈
梯度设置
时间(min)
0
3
6
7
8
10
11
17
a(%)
95
70
60
60
5
5
95
95
b(%)
5
30
40
40
95
95
5
5
质谱条件
电离模式: esi扫描方式: 正离子扫描
检测方式: 多反应监测电喷雾电压: 5500 v
雾化气压力: 50 psi辅助气压力: 50 psi
气帘气压力: 20 psi离子源温度: 500 ℃
定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表
药物名称
定性离子对
定量离子对
碰撞气能量/ev
去簇电压/v
(m/z)
(m/z)
(母离子/子离子)
(母离子/子离子)
克百威
222.0/123.0
222.0/123.0
21
66
222.0/165.0
15
灭多威
163.0/88.0
163.0/88.0
8
30
163.0/106.0
15
3-羟基克百威
238.1/163.0
238.1/163.0
19
80
238.1/181.1
16
茚虫威
528.1/249.1
528.1/249.1
23
90
528.1/218.2
30
甲胺磷
142.1/94.0
142.1/94.0
17
65
142.1/124.9
17
142.1/112.0
17
氧乐果
214.4/155.0
214.4/155.0
20
56
214.4/141.2
19
74
啶虫脒
223.1/126.0
223.1/126.0
27
75
223.1/56.1
30
223.1/90.0
45
吡蚜酮
218.2/104.9
218.2/104.9
27
60
218.2/79.0
51
吡虫啉
256.1/209.0
256.1/209.0
21
65
256.1/127.0
21
内吸磷(o+s)
259.2/89.1
259.2/89.1
12
45
259.2/61.0
40
6、添加回收结果
表1 绿茶中10种农药残留检测的添加回收结果(%)
目标物
添加水平10 μg/kg
基质效应(%)基质标/溶剂标
加标量: 中间液混标1.0 μg/ml, 加100 μl
克百威
108
88.5
灭多威
114
158
3-羟基克百威
106
83.1
茚虫威
120
101
甲胺磷
91.7
95.5
氧乐果
97.3
91.8
啶虫脒
112
139
吡蚜酮
92.8
81.6
吡虫啉
125
102
内吸磷(o+s)
82
93
图1 10种农药标准品20.0 μg/l的mrm色谱图
图2 10种农药标准品20.0 μg/l的xic色谱图
方法二 quechers-uplc-ms/ms法
1、适用范围
本方法适用于茶叶中的克百威、灭多威、3-羟基克百威、茚虫威、甲胺磷、乙酰甲胺磷、敌百虫、氧乐果、啶虫脒、吡虫啉和内吸磷(o+s)的检测。
2、标准品配制
(1) 单标储备液1.0 mg/ml:准确称取适量各标准品，用乙腈配制成1.0 mg/ml的单标储备液；
(2) 混标储备液5.0 μg/ml: 分别吸取各单标储备液，用乙腈配制成5.0 μg/ml混标储备液；
(3) 混标中间液1.0 μg/ml: 吸取混标储备液，用乙腈配制成1.0 μg/ml混标储备液。
3、提取
(1) 取2.0 g样品，加入10 ml水混匀，浸泡30 min；
(2)继续加入15 ml 乙腈，振荡5 min；
(3) 加入6 g 无水*和1.5 g乙酸钠(cat#: 64520s)，振荡1 min，6000 rpm离心5 min；
(3)取出8 ml上清液，待净化。
4、净化——proelut que 15 ml tube (cat#: 64622)
将待净化液加入到15ml proelut quechers净化管，涡旋混合1 min，6000 rpm离心5 min，准确取2 ml上清液于5 ml氮吹管中，40 ℃水浴中氮气吹至近干，加入1 ml甲醇，混匀，上机分析。
注: 同方法制备基质匹配标准溶液
5、分析条件
uplc 条件
色谱柱: leapsil c18，100 x 2.1 mm，2.7 μm (cat#: 86005)
流 速: 0.4 ml/min 进样量: 1 μl 柱 温: 35 ℃
流动相: a: 0.1%甲酸水b: 乙腈
梯度设置
时间(min)
0
3
6
7
8
10
11
17
a(%)
95
70
60
60
5
5
95
95
b(%)
5
30
40
40
95
95
5
5
质谱条件
电离模式: esi扫描方式: 正离子扫描
检测方式: 多反应监测电喷雾电压: 5500 v
雾化气压力: 50 psi辅助气压力: 50 psi
气帘气压力: 20 psi离子源温度: 500 ℃
定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表
药物名称
定性离子对
定量离子对
碰撞气能量/ev
去簇电压/v
(m/z)
(m/z)
(母离子/子离子)
(母离子/子离子)
克百威
222.0/123.0
222.0/123.0
21
66
222.0/165.0
15
灭多威
163.0/88.0
163.0/88.0
8
30
163.0/106.0
15
3-羟基克百威
238.1/163.0
238.1/163.0
19
80
238.1/181.1
16
茚虫威
528.1/249.1
528.1/249.1
23
90
528.1/218.2
30
甲胺磷
142.1/94.0
142.1/94.0
17
65
142.1/124.9
17
142.1/112.0
17
乙酰甲胺磷
184.0/143.0
184.0/95.0
10
60
184.0/95.0
29
敌百虫
256.9/109.0
256.9/109.0
22
80
256.9/127.0
20
氧乐果
214.4/155.0
214.4/155.0
20
56
214.4/141.2
19
74
啶虫脒
223.1/126.0
223.1/126.0
27
75
223.1/56.1
30
223.1/90.0
45
吡虫啉
256.1/209.0
256.1/209.0
21
65
256.1/127.0
21
内吸磷(o+s)
259.2/89.1
259.2/89.1
12
45
259.2/61.0
40
6、添加回收结果
表1 绿茶中11种农药残留检测的添加回收结果(%)
目标物
添加水平50 μg/kg
基质效应(%)基质标/溶剂标
加标量: 中间液混标1.0 μg/ml, 加100 μl
克百威
89%
96%
灭多威
113%
303%
3-羟基克百威
82%
94%
茚虫威
70%
102%
甲胺磷
77%
92%
乙酰甲胺磷
83%
134%
敌百虫
83%
83%
氧乐果
91%
96%
啶虫脒
97%
327%
吡虫啉
105%
77%
内吸磷(o+s)
78%
112%
图1 11种农药标准品13.3 μg/l的mrm色谱图
图2 11种农药标准品13.3 μg/l的xic色谱图
方法三 spe-gc-ms法
1、适用范围
本方法适用于茶叶中内吸磷(o+s)、灭线磷、甲拌磷、莠去津、氯唑磷、甲拌磷亚砜、甲拌磷砜、毒死蜱、三氯杀螨醇、水胺硫磷、丙溴磷、联苯菊酯、氯氰菊酯和高效氯氰菊酯、氰戊菊酯和s-氰戊菊酯的检测。
2、标准品配制
(1)单标标准储备液: 准确称取各农药标准品于10 ml容量瓶中，用甲苯溶解，并定容至刻度；
(2)混合标准储备液: 根据测定需要，吸取适量体积的单标标准储备液于50 ml容量瓶中，并用乙酸乙酯定容至刻度；
(3)混合标准中间液1: 吸取5 ml混合标准储备液于10 ml容量瓶中，并用乙酸乙酯定容至刻度；
(4)混合标准中间液2: 吸取1 ml混合标准储备液于10 ml容量瓶中，并用乙酸乙酯定容至刻度。
目标化合物
浓度(μg/ml)
混合标准储备液
混合标准中间液1
混合标准中间液2
内吸磷(o+s)
20
10
2.0
灭线磷
15
7.5
1.5
甲拌磷
10
5
1.0
莠去津
50
25
5.0
氯唑磷
10
5
1.0
甲拌磷亚砜
10
5
1.0
甲拌磷砜
10
5
1.0
毒死蜱
50
25
5.0
三氯杀螨醇
10
5
1.0
水胺硫磷
50
25
5.0
丙溴磷
50
25
5.0
联苯菊酯
25
12.5
2.5
氯氰菊酯和高效氯氰菊酯
50
25
5.0
氰戊菊酯和s-氰戊菊酯
20
10
2.0
3、提取
(1)取5.0g样品于50 ml离心管中，加入15 ml乙腈，振荡5 min，8000 rpm离心5 min，收集上层清液；
(2)向下层残渣中再加入15 ml乙腈，按步骤(1)重复提取一次，合并上清液；
(3)将上清液在40 ℃水浴下减压蒸至约1 ml，加入6 ml乙腈-甲苯(3-1)溶解，待净化。
4、净化——proelut tpc 12 ml (cat#: 65354)
(1)活 化:
加入10 ml乙腈-甲苯(3-1)，弃去流出液；
(2)上 样:
将待净化液加入柱中，收集流出液；
(3)洗 脱:
加入25 ml乙腈-甲苯(3-1)，合并(2)和(3)流出液；
(4)重新溶解:
将洗脱液在40 ℃水浴下减压蒸干，用乙酸乙酯定容至1 ml，混匀，供gc-ms分析。
注: 同方法制备基质匹配标准溶液。
5、gc-ms条件
色谱柱: dm-5ms, 30 m × 0.32 mm × 0.25 μm(cat.# 8231)
进样口温度: 240 ℃
升温程序: 初始温度70 ℃，保持2 min，以25 ℃/min升温至150 ℃，再以3 ℃/min升温至200 ℃，再以8 ℃/min升温至280 ℃，保持12 min
载气: 氦气，柱流速: 1.46 ml/min
进样方式: 不分流进样
进样量: 1.0 μl
离子源温度: 230 ℃
接口温度: 280 ℃
溶剂延迟: 6 min
电子轰击电离源(ei): 选择离子监测模式(sim)，分组监测见表1
表1 选择离子监测组表
通道
起始时间(min)
结束时间(min)
选择离子(m/z)
1
9.70
11.20
158,200,242,88,115,171
2
11.60
13.90
260,121,231,88,114,170,200,215,173
3
14.50
15.50
161,257,285
4
17.90
20.00
125,153,97,314,258,286,139,141,250,136,121,230
5
23.00
25.00
339,374,297
6
28.00
30.00
181,166,165
7
32.00
43.87
181,152,180,167,225,419,125
6、添加回收结果
绿茶和红茶中多种农药残留量的gcms检测添加回收结果
目标化合物
添加浓度(mg/kg)
(加标量: 混合标准中间液1，加50 μl)
回收率(%)
添加浓度(mg/kg)
(加标量: 混合标准中间液2，加50 μl)
回收率(%)
绿茶
红茶
绿茶
红茶
内吸磷(o+s)
0.1
79.41
75.44
0.02
73.99
73.23
灭线磷
0.075
97.87
92.21
0.015
84.14
90.30
甲拌磷
0.05
93.09
77.50
0.01
87.64
75.28
莠去津
0.25
88.92
85.02
0.05
85.96
82.33
氯唑磷
0.05
98.33
91.77
0.01
87.96
87.74
甲拌磷亚砜
0.05
96.05
97.89
0.01
99.73
87.17
甲拌磷砜
0.05
99.10
93.79
0.01
86.00
84.28
毒死蜱
0.25
101.15
91.08
0.05
88.21
84.23
三氯杀螨醇
0.05
89.79
85.44
0.01
80.25
87.10
水胺硫磷
0.25
97.97
90.47
0.05
91.88
81.02
丙溴磷
0.25
95.46
85.85
0.05
83.23
77.98
联苯菊酯
0.125
102.37
93.98
0.025
94.47
86.04
氯氰菊酯
高效氯氰菊酯
0.25
98.21
91.93
0.05
94.17
89.73
氰戊菊酯
s-氰戊菊酯
0.1
109.83
105.98
0.02
119.19
102.30
14种农药残留标准(10 μg/ml)tic图
方法四spe-uplc-ms/ms法
1、适用范围
本方法适用于绿茶、花茶、铁观音、红茶和普洱茶中氨甲基膦酸和草甘膦的检测，定量限0.1 mg/kg。
2、标准品配制
单标标准储备液: 准确称取各标准品，用水配制成1000 μg/ml的单标标准储备液。
混标标准中间液: 分别吸取各单标标准储备液，用水配制成1.0 μg/ml、10 μg/ml和50 μg/ml的混标标准中间液。
3、提取
取1 g茶叶于50 ml离心管中，准确加入10 ml水、10 ml二氯甲烷，振荡10 min，超声10 min，8000 rpm离心5 min，取5 ml上清液，待净化。
4、净化——proelut gly 6 ml (cat.#: 65938)
(1)活 化:
依次加入5 ml甲醇、5 ml水，弃去流出液；
(2)上 样:
将待净化液加入柱中，弃去前3 ml流出液，收集后2 ml流出液，混匀，滤液过0.22 μm尼龙滤膜，上机分析。
注: 同方法制备基质匹配标准溶液。
5、uplc-ms/ms条件
5.1 uplc 条件
色谱柱: dikma polyamino hilic, 150 × 2.0 mm, 5 μm (cat.#: 99302)
流 速: 0.2 ml/min 进样量: 10 μl 柱 温: 35 ℃
流动相: a: 乙腈 b: 5 mm乙酸铵溶液，氨水调节至ph=11
梯度设置:
time(min)
0
2
2.1
8
8.1
15
a(%)
80
80
20
20
80
80
b(%)
20
20
80
80
20
20
5.2 质谱条件
电离模式: esi
扫描方式: 负离子扫描
检测方式: 多反应监测
电喷雾电压: -4500 v
雾化气压力: 60 psi
辅助气压力: 60 psi
气帘气压力: 35 psi
离子源温度: 550 ℃
定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表
目标化合物
定性离子对
(m/z)
(母离子/子离子)
定量离子对
(m/z)
(母离子/子离子)
碰撞气能量/ev
去簇电压/v
氨甲基膦酸
109.9/62.8
109.9/62.8
-23
-53
109.9/78.9
-35
-51
草甘膦
167.8/62.8
167.8/62.8
-30
-50
167.8/81.0
-21
-31
6、添加回收结果
茶叶中氨甲基膦酸和草甘膦的lc-ms/ms检测添加回收结果
样品
基质
回收率(%)
添加水平: 0.1 mg/kg
添加水平: 1 mg/kg
添加水平: 5 mg/kg
加标量: 1.0 μg/ml，加100 μl
加标量: 10 μg/ml，加100 μl
加标量: 50 μg/ml，加100 μl
氨甲基膦酸
草甘膦
氨甲基膦酸
草甘膦
氨甲基膦酸
草甘膦
绿茶
103
91
99
109
92
101
花茶
95
105
109
85
93
99
铁观音
84
81
83
94
80
100
红茶
100
101
86
85
89
98
普洱茶
80
95
89
95
88
102
r^2 = 0.9990
标准曲线浓度分别为: 10 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml、250 ng/ml、500 ng/ml
r^2 = 0.9990
标准曲线浓度分别为: 10 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml、250 ng/ml、500 ng/ml
茶叶中多种农药残留的检测相关产品信息:
货号
名称
规格
标准品
来电咨询
农药残留标准品
多种规格
样品前处理
65354
茶叶中农残检测萃取柱 proelut tpc
12 ml, 20/pk
64520s
quechers 萃取盐 6 g mgso4,1.5 g naoac
50/pk
64622
15 ml 净化管, 400mg psa / 400mg c18 / 200mg carb / 1200mg mgso4
50/pk
65938
草甘膦检测固相萃取柱 proelut gly
6 ml, 30/pk
244358
12管防交叉污染真空spe萃取装置
12位
4803
1,3,6 ml柱管通用连接器
15/pk
4806
考克(控制流量)
15/pk
99011
真空/正压两用泵，无油
1/pk
99013
抽滤瓶套装
(包括硅橡胶管2米,2 l抽滤瓶及橡胶塞)
1/pk
30039
fitmax针头式过滤器 nylon
13 mm, 0.22 μm 100/pk
色谱柱及保护柱
86005
uhplc/hplc兼容色谱柱 leapsil c18
100x2.1 mm,2.7 μm
8231
气相毛细柱 dm-5ms
30 m × 0.32 mm × 0.25 μm
99302
dikma polyamino hilic
150 x 2.0 mm, 5 μm
hplc溶剂ÿ缓冲盐ÿ离子对试剂
50101
乙腈 hplc级
4 l
50102
甲醇 hplc级
4 l
50104
乙酸乙酯hplc级
4 l
50144
甲酸 hplc级
50 ml
通用色谱产品
52401b
瓶架/蓝色(现货)
50孔
52401a
瓶架/白色(现货)
50孔
1034
样品瓶(棕色/螺纹)
2 ml, 100/pk
1035
样品瓶盖/含垫(已经组装)
100/pk
h80465
hplc 进样针
25 μl
红色产品货号#30039、#1034、#1035*……