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ELISA检测e抗原灵敏度更高

e抗原是从乙肝表面抗原(hbsag)阳性血清中发现的一种新抗原,他可能与乙型肝炎的传染性有密切关系。李羽等报导用elisa检测e抗原的灵敏度比琼脂免疫扩散法高150—300倍。试验程序:
1.患者免疫球蛋白igg(e抗体)的提取:用饱满硫酸铵沉淀法处理上述抗体阳性人血清所得粗提液过柱(deae-cellulose)搜集igg阳性部分,再穿流正常人血清柱。得igg(e抗体),浓缩为5ng/ml储藏放于冰箱中。
2.酶符号igg(e抗体)的制备:用戊二醛二步法,将10mg hrp交联5 mg igg(e抗体),分装于小瓶,在低温(-20°c)下保存。
3.elisa对e抗原的检测:
a. igg(e抗体)包被聚苯乙烯微量反响板,在4°c过一夜(igg浓度为25r/ml)。
b.洗刷3-5次。
c.加待检病员血清(1:10稀释,每份标本加两孔,每孔0.1ml,37°c孵育2h).
e.洗刷3-5次。
f.加酶符号igg(e抗体),37°c孵育2h(酶符号igg稀释度为1:640)。
g.洗刷3-5次。
h.加底物与供氢体(h2o2与opd),置于暗处反响30min.
i.加2mol/l硫酸停止反响。
j.每板均设阳性与阴性对照,依据不同的显色反响予以判别。
k.通过上诉办法检测开始确定为阳性的标本,取两份,一份加足量的e抗体血清,另一份加正常人血清,在37°c孵育1h,然后再按上述办法测定e抗原。加e抗原体血清者,在显色反响受到操控(与正常血清比照)时才可判别为e抗原阳性。
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