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气单胞菌通用PCR试剂盒的PCR反应条件设置

气单胞菌通用pcr试剂盒的pcr反应条件设置:
a)预变性:95℃,5 min可以让白细胞裂解,释放可用于pcr扩增的基因组dna。请勿缩短时间或降低温度。
b)退火温度:退火温度设置为引物tm值即可。然而,使用高的退火温度可以有效减少非特异性扩增,并提高全血模板的扩增效率。因此,如扩增产物特异性较差,可以建立一个温度梯度反应去寻找引物模板适退火温度。
c)延伸时间:按30 sec/kb设定,如不足30 sec,设置30 sec即可。
d)扩增循环数:35个循环已可以扩增足量产物。太多的循环将会导致非特异性扩增增加。
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