一、 实验仪器与试剂
表格一：实验仪器
仪器
厂家
型号
细胞培养箱
thermo scientific
hera cell co2
激光共聚焦显微镜
leica
tcs sp5
表格二：试剂
试剂
厂家
细胞培养基
gibco
pbs (0.1 m, ph 7.4)
自配
4 %多聚*
索来宝
bsa
sigma
triton-x-100
生工生物
fitc 标记羊抗兔荧光二抗
santa cruz
dapi
碧云天
二、 实验步骤
制作细胞爬片,根据实验方案进行加样操作；
反应 24h 后，弃原有培养液， pbs 洗 1 次；
4％的多聚甲醛 4 度固定 15 分钟，pbs 洗 2 次，5 分钟/次；
4. 加入 0.1％的 triton-x-100，室温孵育 15 分钟；
5. pbs 洗 3 次，5 分钟/次；
6. 10％bsa 封闭 30 分钟；
加入一抗 50μl（稀释度为 1：100），4℃过夜孵育；
第二天复温 30min，pbs 洗 3 次，5 分钟/次；
每组分别加入 fitc 标记羊抗兔荧光二抗 50μl（稀释度为 1：500），37℃培养 30 分钟；
pbs 洗 3 次，每次 5 分钟；
11. dapi 染色 5 分钟；
pbs 洗 3 次，每次 5 分钟；
在激光共聚焦显微镜上观察（使用 405nm 和 488nm 的激发光源进行荧光检测）。
三、 实验结果