摘要中药里经常有一些成分必须用 hplc液相色谱仪 检测，但缺乏生色团，在紫外检测下没有信号。agilent 1200 系列蒸发光散射检测器（elsd）可以检测比流动相挥发性低的所有溶质，因此是一种替代手段。在中国药典 2005 版中，有几种需要使用 elsd 检测的中药成分，本应用报告列举了两个例子——银杏（ginkgo biloba l）中的黄酮，以及黄芪中的黄芪甲苷。
前言蒸发光散射检测器作为 hplc 系统中对无 uv 吸收分析物的准通用型检测器，正得到越来越广泛的应用。特别是在草药中，越来越多无 uv 吸收的化合物需要以非衍生化状态进行检测。agilent 1200 系列 hplc 产品线中的一个新成员——蒸发光散射检测器——将为这类应用提供帮助。agilent 1200 系列 elsd 可以检测比流动相挥发性低的所有溶质。只有样品形成的非挥发性颗粒才能产生信号。如果某些化合物没有生色团，其挥发性又比液相色谱溶剂低，elsd 就可作为使用简便、灵敏度高的优良检测器。梯度流动相也不干扰检测。如果流动相在特定 uv波长下产生强吸收，则 elsd 将是另一种替代手段，可以保持基线的稳定，并产生强信号。elsd 的工作原理包括三个主要的连续步骤：a) 用氮气或空气使色谱洗脱液雾化b) 在相对低的温度下让流动相蒸发c) 残留颗粒（包括分析物分子）产生光散射图 1 显示了检测的各个阶段。
中药的某些组分没有生色团，因此需要一种通用的检测器进行检测。agilent1200 系列 elsd 与其它通用检测器相比有明显优势。质谱（ms）较昂贵，而且需要经过良好培训、具备相关知识的操作者。质量控制部门的常规分析工作一般不用质谱。示差折光检测器能进行通用的检测，但只能用于等度分析，不适合分离复杂混合物。如果配置 uv 检测器的系统串联一台 elsd，将能同时检测各类结构的多种化合物（带生色团或不带生色团）
中国药典 2005 版中，有几种中药成分需要用 elsd 检测。例如，银杏中的黄酮和黄芪中的黄芪甲苷。银杏（ginkgo biloba l.）及其提取物不仅在中国非常有名，而且也在世界各地被广泛用于治疗心脑血管疾病。它的疗效主要来源于与黄酮一起存在的银杏内酯和白果内酯。质量控制方法必须能够测定银杏及其制品中黄酮的含量。黄芪（radix astragali），是一种在中国广泛使用的中药。药理实验和临床研究已证明，黄芪具有多种生物活性，被用于治疗肾炎、糖尿病、高血压等疾病。其有效成分之一，黄芪甲苷，不含生色团，需要一种通用检测器来测定其含量。本应用报告中，我们探讨了银杏黄酮和黄芪甲苷的分离和定量分析。本报告还提供了使用 agilent 1200 系列 elsd 的一些建议。
实验部分仪器开发高分离度快速液相色谱（rrlc）方法，使用配置如下的 agilent 1200 系列rrlc 系统：• 带脱气机的 agilent 1200 系列 sl 型二元泵• agilent 1200 系 列 sl 型 高 效 自 动 进样器• agilent 1200 系列 sl 型柱温箱• agilent 1200 系列 sl 型二极管阵列检测器，配置微量流通池 (2 µl 体积，3 mm光程)• agilent 1200 系列蒸发光散射检测器，带标准喷雾器• agilent 化学工作站 b.03.02，用于数据采集和处理• agilent zorbax xdb-c18 快速分离高通量 (rrht) 色谱柱，3.0 x 50 mm，1.8 µm 粒径
系统设置hplc 组件按一般方式连接，如图 2 所示。agilent 1200 系列 elsd 通过 rs-232 电缆与计算机相连。遥控电缆将 agilent1200 系列 elsd 与 hplc 其它组件连接。系统测试实验开始之前，应对 agilent 1200 系列elsd 进行测试，以确保其处于良好状态，且性能合格。测试条件：• 样品： 250 µg/ml（或相似浓度）• 溶剂： 等度，80% 水，20% 乙腈• 流速： 1 ml/min• 进样量： 20 µl• 色谱柱： agilent zorbax eclipsexdb-c18，4.6 x 150 mm，5 µm (或其它相当规格的色谱柱)• 柱温箱 (tcc) 温度：40 °c• elsd 温度：40 °c• elsd 压力：3.5 bar (51 psi)• elsd 增益：7• elsd 过滤器：1 秒• 一般系统：agilent 1200 系列标准液相色 谱 系 统 （请 注 意 ，需 要 进 行 常 规hplc 分 析 时 ，也 可 以 使 用 agilent1200 系列 rrlc 系统)方法运行后，若仪器安装后处于良好状态，应记录检测器响应值。以后每次需要的时候都应该用同样的方法进行性能检查。elsd 不能使用不挥发的缓冲液。如果不挥发的盐进入 elsd，检测器将无法区分这些不挥发颗粒是来自样品还是缓冲液。因而使基线明显抬高，样品的信噪比降低。由于 elsd 只能检测挥发性比流动相差的化合物，所以在开发新方法时，应当用另一种检测器来确定所有化合物都可以从色谱柱中洗脱
标准品和样品制备本实验使用下列标准品、样品和溶剂：• 标准品购自 nicbp（中国药品与生物制品检定所）• 溶剂（甲醇、乙腈、四氢呋喃）均购自thermo fisher scientific 公司• 水经 millipore 纯水系统制备• 黄芪样品购自中药店• 银杏提取物由用户馈赠样品制备过程如下，称取 1 克样品，溶于5 ml 甲醇，超声混合 30 分钟，过滤，取澄明溶液进样。银杏分析方法• 流动相： a = 水，b = 四氢呋喃/甲醇，体积比 10/25• 流速： 0.7 ml/min• 梯度： 0 分钟，12% b；10 分钟，16% b；15 分钟，22% b；20 分钟，30% b• elsd： 温度 = 40 °c，压力 = 50 psi，增益 = 7，过滤器 = 3 秒黄芪分析方法• 流动相： a = 水，b = 乙腈• 流速： 0.7 ml/min• 梯度： 0 分钟，20% b；1 分钟，30% b；5 分钟，35% b；30 分钟，100% b• elsd： 温度 = 40 °c,压力 = 50 psi，增益 = 5，过滤器 = 3 秒
结果与讨论银杏的分析银杏及其制品的成分非常复杂，需要用hplc 进行良好分离。过去由于仪器的限制，常常采用等度方法。等度方法的缺点是分析时间长，分离度较差。本应用报告采用梯度方法，在较短的时间内获得较好分离。图 3 显示的是银杏黄酮标准品的色谱图，elsd 和 uv 两个通道信号的对比。黄酮在 210 nm 波长下有很低的响应，254 nm没有响应。对 uv 和 elsd 的灵敏度进行比较说明了测定银杏中黄酮时采用 elsd是必要的。本方法还能通过查看 uv 补充信号辨别这些色谱峰中是否包含纯的黄酮。图 4 中的色谱图显示 elsd 能够检测出银杏样品中的许多峰。该样品成分非常复杂，elsd 信息有助于找出更多组分，包括缺乏生色团的成分。4 个黄酮峰彼此分离，并与其它组分分开。运行 elsd 方法时，即使 elsd 信号中已经没有色谱峰出现，还是要监测 uv 通道，以确定所有组分都已从系统中洗脱出来，避免污染色谱柱和系统。
关键词：柱温箱 脱气机 喷雾器 喷雾器 数据采集