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人全段甲状旁腺素(i-PTH)ELISA免费代测试剂盒​操作步骤

人全段甲状旁腺素(i-pth)elisa免费代测试剂盒操作步骤:
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
800 ng/l 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
400 ng/l 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
200 ng/l l 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
100 ng/l 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
50 ng/l 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2. 加 样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样 品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂a50μl,再加入显色剂b50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(od值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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