细胞培养进程中会呈现一些问题,比方:细胞无法在培养皿上贴壁生长,细胞生长缓慢。那么该怎么处理呢?
一、细胞无法在培养器皿上贴壁生长
1.细胞*消化过度:缩短*消化时间或减少*用量。
2.支原体污染:隔绝细胞,检测是否感染支原体;清洗通风厨和培养箱,如细胞被污染,灭菌处理后丢掉。
3.培养基中无附着因子:如果运用的是无血清配方,应确保含有附着因子或许运用通过包被的培养板。
二、细胞生长缓慢
1.培养基或血清改动:比较不同培养基配方中葡萄糖、氨基酸及其他成分有无差异;通过生长实验比较新老批次血清有无差异;增大细胞初始接种密度;使细胞逐步适
应新的培养基。
2.必需生长促进成分(如l-*或生长因子)耗竭、短少或分化:去除原培养基,参加新鲜培养基;向培养基中增加生长促进成分(如l-*)。
3.轻度细菌或真菌污染:在不增加抗生素的条件下进行培养,如细胞被污染,灭菌处理后丢掉。
4.时间存储不妥:血清应于-5℃至-20℃下贮存;培养基应于2℃~8℃下避光贮存;尽量减少血清和培养基见光时间。
5.细胞初始接种密度低:增大活细胞接种密度。
6.细胞变老、老化:将老化细胞丢掉,取用代数较少的细胞。
7.支原体污染:隔绝细胞,检测是否感染支原体;清洗通风厨和培养箱,如细胞被污染,灭菌处理后丢掉。
三、悬浮细胞集成团
1.存在钙离子和镁离子:用不含钙离子和镁离子的*清洗细胞,悄然吹打细胞,使其构成单细胞悬液。
2.支原体污染:隔绝细胞,检测是否感染支原体;清洗通风厨和培养箱,如细胞被污染,灭菌处理后丢掉。
3.蛋白水解酶消化过度导致细胞裂解、dna开释:用0.001%dna酶i处理细胞;用pbs冲刷后再接种到新培养基中。
四、培养基ph值改动敏捷
1.培养箱co2分压设置过错:依据培养基中nahco3的浓度增大或下降培养箱co2的分压,nahco3浓度为2.0-3.7g/l时,应相应地运用5%-10%的co2分压。
2.细胞培养瓶瓶盖过紧:将瓶盖旋松