植物油中黄曲霉毒素b1含量的免疫亲和柱法
√黄曲霉毒素b1的介绍黄曲霉毒素b1(aflatoxin b1简写为afb1)是二氢呋喃氧杂萘邻
的衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻tong(香dou素)，其污染的食物主要是花生、玉米、稻谷、小麦、花生油等粮油食品。黄曲霉毒素b1是目前已知的化学物质中致癌性强的一种，对肝脏的损害极其严重。
√黄曲霉毒素b1的安全量国家食品安全标准《gb 2761-2017》规定植物油脂（花生油、玉米油除外）中黄曲霉毒素b1的允许量不得超过10 ug/kg。花生油、玉米油中黄曲霉毒素b1的允许量不得超过20 ug/kg。
冠一生物开发使用免疫亲和柱法检测植物油中黄曲霉毒素b1的含量，平均回收率为92.9%，rsd 4.1%,为客户提供关于植物油中黄曲霉毒素b1检测有效的解决方案。
√实验目的本研究利用免疫亲和柱法作为样品的前处理方法，hplc法作为分析方法，检测植物油中黄曲霉毒素b1的含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
√实验目标物黄曲霉毒素b1（cas:1162-65-8）。
√应用范围本方法适用于植物油中黄曲霉毒素b1检测的hplc检测及确证。
√参考标准《gb 5009.22-2016食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素b族和g族的测定》。
√实验材料黄曲霉毒素b1免疫亲和柱
√实验方法1.样品提取
准确称取植物油试样5.0 g试样（精确至0.01 g）于50 ml离心管中，加入20 ml乙腈-水（84+16）溶液，涡旋混合1 min，超声提取20 min，在5000 r/min离心10 min，提取上清液4 ml于另一个离心管中，加入21 ml水，混匀待净化。
2.免疫亲和柱净化
(1)上样：将12 ml注射器连接于免疫亲和柱上端，取待净化液样品液以1-2滴/秒的速度通过免疫亲和柱，弃掉流出的液体。
(2)淋洗和洗脱：用20 ml水淋洗柱子，分两次淋洗，弃掉流出的液体；抽干小柱；加入2×1 ml甲醇缓慢洗脱亲和柱，流速约为2-3滴/秒；50 ℃下氮吹至近干，待衍生。
3.衍生化反应
(1)加入100 ul三氟yi酸，200 ul正己烷于待衍生样品中，于40 ℃水浴避光衍生15 min。
(2)重新溶解：50 ℃下氮吹至近干，加入1ml乙腈-水（15+85）溶液溶解，0.22um滤膜过滤，供hplc分析。
4.hplc条件设备：waters alliance 2695
色谱柱：inersustain®-c18 (4.6 mmx250 mm, 5 μm)
检测器：waters 2475荧光检测器
检测波长：激发波长：365 nm 发射波长：435 nm
流动相：a：乙腈 b：水
洗脱方式：梯度洗脱
表1 流动相梯度洗脱程序
流速：1 ml/min
进样体积：10ul
√实验结果1、1.0ug/kg 猪肉基质中黄曲霉毒素b1的添加回收结果
表1 1.0ug/kg猪肉基质中黄曲霉毒素b1的添加回收结果
2、添加水平为1.0ug/kg猪肉基质中黄曲霉毒素b1检测的液相色谱图
图1 添加水平为1.0ug/kg猪肉基质中黄曲霉毒素b1检测色谱图