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支原体检测,测的是什么?上清 or 细胞?

在细胞治疗、疫苗生产等领域,药物在上市前,需要通过支原体检测,证明生产过程中没有支原体的污染。一般情况下,支原体附着在细胞表面,因此,在检测前,收集细胞后,保留上清,用于后续检测实验。
德国mb公司生产的venor®gem qep试剂盒设计用于定量检测细胞培养物和其他生物基质中的支原体, 该试剂盒是基于实时或定量pcr (qpcr),作为快速,稳健和敏感支原体的,可替代《药典》种传统方法的检测手段。
该检测针对支原体基因组中的一个高度保守区域,以检测欧洲药典第2.6.7章(ep 2.6.7)、日本药典第g3章(jp g3)和更多物种(见“检测特征”一节中的列表)中包含的所有物种。
该产品已通过广泛的qpcr设备成功测试。试剂盒设计满足ep 2.6.7和jp g3对不同样品材料(软骨细胞、血清、细胞培养上清等)提取样品dna后的检测标准。
实验开始时,需要先收集细胞培养上清,如果细胞含量较低,可对培养物进行富集。用支原体提取试剂盒,对其中的dna进行提取。
整个测试需要不到3小时,并且与基于发光的酶测定、荧光染色或培养方法相比,不需要活的支原体细胞。值得注意的是,与几种生化和细胞方法相比,pcr检测被认为在灵敏度和精度方面优越。该试剂盒包含所有必要的pcr成分,包括热启动taq聚合酶,引物和dntps在冻干混合物(支原体混合物)以及补液缓冲液和pcr级水。
德国mb还可提供10cfu/100cfu的配套标准品,以及各类支原体基因组dna,帮助相关项目完成药典的方法学验证。
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