单胺氧化酶（mao）检测试剂盒（醛苯腙比色法）
产品货号：ba1574
产品规格：50t/100t
产品简介：
单胺氧化酶(monoamine oxidase，mao)是一组催化多种单胺类化合物氧化脱氨的酶，属于细胞外酶，含有铜离子，分布于肝脏、肾脏等组织的线粒体内，其含量分布为肝脏＞心脏＞肾脏＞脑＞肺＞骨骼肌。血小板、胎盘中也含有mao。线粒体中的mao与膜紧密结合，仅少量为可溶性的，存在于细胞质中，血液和结缔组织中的 mao为水溶性。
尚宝生物 单胺氧化酶 (mao)检测试剂盒 (醛苯腙比色法)其检测原理是待测样品在mao作用下，氧化底物苄胺生成苄醛，后者经催化反应生成醛苯腙，呈棕红色，通过分光光度计检测470nm处吸光度，根据标准曲线即可测出mao活力。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
产品组成：
名称
50t
100t
保存条件
试剂(a): 苄醛标准(5mmol/l)
1ml
2ml
2-8℃，避光
试剂(b): mao assay buffer
50ml
100ml
室温
试剂(c): 苄胺缓冲液
50ml
100ml
2-8℃，避光
试剂(d): 苄醛显色液
25ml
50ml
2-8℃，避光
试剂(e): 苄醛显色缓冲液
50ml
100ml
室温
自备材料：
1.蒸馏水
2.离心管或小试管
3.比色杯
4.分光光度计
使用方法：
1.准备样品：
①血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-70℃冻存，用于mao的检测。
②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清， -70℃冻存，用于mao的检测。
③高活性样品：如果样品中含有较高活性的mao，可以使用mao assay buffer稀释。
④(选做)样品准备完毕后可以用bca蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的mao含量。
2.稀释标准品：用mao assay buffer稀释苄醛标准(5mmol/l)至0.5mmol/l，即为苄醛标准工作液，4℃保存，备用。以苄醛标准工作液 (0.5mmol/l)，按下表制备标准曲线。
加入物
0
1
2
3
4
5
6
7
8
苄醛标准工作液(ml)
0
0.01
0.02
0.04
0.08
0.12
0.16
0.20
0.24
mao assay buffer(ml)
0.75
0.74
0.73
0.71
0.67
0.63
0.59
0.55
0.51
相当于苄醛(nmol/管)
0
5
10
20
40
60
80
100
120
相当于mao单位(nmol/h∙l)
0
12.5
25
50
100
150
200
250
300
3.mao检测：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
空白管
标准管
测定管
待测样品(如血清等)(ml)
0.2
-
0.2
maoassaybuffer(ml)
0.5
0.5
0.5
苄胺缓冲液(ml)
0.5
1.0
1.0
混匀，37℃水浴2h。
苄醛显色液(ml)
0.5
0.5
0.5
苄胺缓冲液(ml)
0.5
-
-
混匀，37℃水浴20min。
苄醛显色缓冲液(ml)
1.0
1.0
1.0
蒸馏水(ml)
1.0
1.0
1.0
4.混匀，分光光度计470nm处检测吸光度值，比色杯1.0cm光径，以蒸馏水调零，读取各管吸光度值。一般应数小时内检测完毕。绘制标准曲线，根据(a测定-a空白 )之差值在标准曲线上查出mao活力单位。酶活力高于上限者，应将样品稀释后重新测定，结果乘以稀释倍数。
计算：
mao活性单位的定义：在37℃ 1ml血清中mao 1h催化底物产生1nmol苄醛为一个mao酶活力单位。根据酶活性定义，计算出样品中的mao活性。
以标准管苄醛nmol数为横坐标，以吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，用(a测定-a空白之差值在标准曲线上查出待测样品的苄醛nmol数。)
血清mao活力(u/ml或nmol/h∙ml)=苄醛(nmol)×vt×n/t×vs =苄醛(nmol)×2.5
组织mao活力(u/mg或nmol/h∙mg)=苄醛(nmol)×vt×n/(t×vs ×待测样品蛋白浓度mg/ml)
式中：
vt=待测样品总体积(ml)
n=待测样品检测前的稀释倍数
vs =检测时所用样品体积(ml)
t=反应时间(min)
注意事项：
1.胆红素浓度小于257μmol/l，血红蛋白浓度小于4g/l，对mao活力检测没有影响。
2.若更换为国际单位，应除以60。
3.加入苄醛显色缓冲液后，应1h内检测完毕。
4.在皂化过程中，震荡不要剧烈，以免形成乳化层。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。