转染细胞的方法有很多,这里介绍一种比较经济实用的转染试剂--聚乙烯亚胺(即pei)。pei(polyethylenimine)是一种带有高电荷阳离子的多聚物,非常容易结合带负电荷的dna分子,形成复合物,并转染到贴壁和悬浮细胞中,常用于大规模瞬时转染表达。在hek293和cho等细胞中转染效率较高。那么如何利用pei转染细胞呢?
实验前准备:
pei (polysciences, cat#:24765-1),将pei配置成1ug/ml,用0.2μm滤膜过滤,并分装储存于负80度。
实验步骤(以转染293t为例):
1.在六孔板中铺10万个细胞,在二氧化碳培养箱中孵育过夜。
2.在100ul dmem中加入2ug目的质粒。如果是10cm皿可以加入5ug质粒。
3.加入10ul pei,立即混匀。室温孵育10min。
4.然后再补加600ul dmem培养基。
5.吸掉六孔板中的培养基,然后将700ul混合液慢慢加入到细胞中,轻轻摇晃混匀。
6.在二氧化碳培养箱中孵育3小时,然后加入2ml wan全培养基(dmem+10%fbs)。
7.培养箱中孵育48小时,进行下一步实验。
本期内容:如何利用pei转染细胞呢?
下期内容:怎么选择瞬时转染和稳定转染呢?