本文摘自和光纯药时报 vol.87 no.4（2019年10月号），由麻布大学兽医学部 解剖第二研究室 小泽秋沙执笔撰写。
本法是一种可使临床检查或研究中应用广泛的组织化学染色苏木精-伊红（he）或masson法（mt）染色的组织切片脱色，并可重新用于其他染色的方法。
迄今为止，每一种组织化学染色通常都需要使用至少一片组织切片，因此必须准备与组织化学染色方法相对应数量的组织切片。然而，由于制备组织切片时的技术熟练度以及组织样品状态、大小等原因，有时很难备齐多个适合评价的组织切片。另外，在评价同一细胞时一般使用连续切片的方法，然而即使获得了合适的连续切片，想要观察的组织结构和细胞内结构，也可能不同时存在于两个相邻的组织切片上。
在这种情况下，重复利用已有观察特征的细胞或结构的组织切片就会十分有用。he染色可获取组织大致特征，因此是*染色的代表染色法之一，如果可以对he染色后的目标结构的组织切片进行重新染色，便可以提高临床检查以及研究结果的准确性。
至今为止，组织切片脱色通常使用乙醇与盐酸的混合溶液、含有草酸、*的溶液。然而，这些脱色方法都会影响组织切片在脱色后的再染色效果。
实际上，在乙醇中加入盐酸的溶液不能对苏木精等染料充分脱色。而通过*、草酸脱色则会对组织切片造成很大的损害，重新染色时组织结构可能会因为切片剥离被破坏，从而限定了再染色的方法，也限制了组织切片的再利用。因此，学界期待开发一种几乎不会损害组织切片，并且可以对多种染色法进行脱色后再染色的全新方法。
这次，fujifilm wako开发的decolorizing solution，可以对he染色后确认了组织状态（特定的结构及细胞的存在）的切片脱色，再重新用于其他染色，从而能够从同一组织切片中获得更多信息。该方法的特点在于可以对原本难以脱色的苏木精、铁苏木精进行脱色。
使用方法：首先将染色后密封的载玻片标本浸入二甲苯等有机溶剂中，直至盖玻片自然剥落。请注意，在此过程中若是强行分离盖玻片可能会破坏组织切片。
另外，若在组织切片上仍然残留有封固剂的状态下就进行下一步骤，水溶性色素在水合后不会脱落，会降低随后使用decolorizing solution进行脱色的效果，因此必须使用二甲苯等有机溶剂充分浸泡。必须注意的是，标本越旧，封固剂的固化越牢固，封固剂就越难去除。
其次，将组织切片依次用各种浓度的乙醇进行水合，后浸入蒸馏水中。在水合过程中，伊红等水溶性色素基本脱色，组织切片上仅残留染色的苏木精。将残留苏木精染色的组织切片浸入按照使用浓度稀释的decolorizing solution 1中。脱色主要取决于组织切片染色后保存的时长，但苏木精在室温下于decolorizing solution 1中浸渍1 h基本就能脱色。
铁苏木精脱色时需要在decolorizing solution 1中浸渍1 h后使用蒸馏水清洗3次，然后浸渍于decolorizing solution 2。通过光学显微镜确认脱色程度（染色残留情况），确认不会影响下次染色后，浸渍于蒸馏水并清洗3次，这时可用于重新染色。
目前，在使用decolorizing solution脱色后，可以使用的再染色方法已确认的有he染色、pas染色、mt染色和免疫组织化学染色。
图1和图2分别是小鼠海马体以及肝脏在he染色后使用decolorizing solution按照上述步骤脱色后的图片。如图１a及图２a所见，包括细胞核在内，被苏木精染色的部分在图1b及图2b中大部分已被脱色。
图1. 使用decolorizing solution 1脱色he 染色后的组织切片并重新染色
a：he染色的小鼠海马体组织图像
b：使用decolorizing solution 1脱色后与a相同位置的组织图像
c：脱色后使用抗iba1抗体进行荧光免疫组织化学染色后与a和b相同位置的组织图像
图2. 使用decolorizing solution 1脱色he 染色后的组织切片并重新染色
a：he染色的小鼠肝脏组织图像
b：使用decolorizing solution 1脱色后与a相同位置的组织图像
c：脱色后使用抗pcna抗体进行免疫组织化学染色后与a和b相同位置的组织图像
另外，图3为小鼠肝脏以及肾脏在mt染色后使用decolorizing solution 1和2脱色后的图像。图3a和c中包括细胞核在内，被铁苏木精染色的大部分在图3b和d中均已*脱色。
图3. 使用decolorizing solution 1和2对mt 染色后的组织切片脱色
a：mt染色后的小鼠肝脏组织图像
b：使用decolorizing solution 1和2脱色后与a相同位置的组织图像
c：mt染色后的小鼠肾脏的组织图像
d：使用decolorizing solution 1和2脱色后与c相同位置的组织图像
图1c为小鼠海马体脱色后使用抗iba1抗体（fujifilm wako pure chemical corporation）进行免疫组织化学染色的图片，图1a和b为同一位置的图像。如图可见，脱色后的海马体切片仍然可以检测出iba1阳性小胶质细胞突起。图2c为小鼠肝脏脱色后使用抗pcna抗体进行免疫组织化学染色的图片。如图可见，阳性pcna主要在肝细胞的细胞核中表达。
另外，并未发现因脱色导致的组织切片破坏等损伤。
该方法的优点在于，大量*保存在大学、研究所、医院等的*组织切片，在制备时没有新型染色方法以及针对新型抗原的抗体，通过再染色等方法可以重新评价以获取新的实验信息。
目前，decolorizing solution的应用只适用于he 染色和mt 染色后的脱色，但随着该方法的应用范围拓展，脱色法在重复使用组织切片方面的实用性将进一步提高。
◆产品列表
产品编号产品名称规格包装
043-34561 decolorizing solution 1 病理研究用 250 ml
046-34551 decolorizing solution 2 病理研究用 250 ml
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