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使用显色液时需要注意哪些要点?

显色液sds-page电泳后,蛋白质按照分子量大小分离,转移到固相载体( 例如硝酸纤维素薄膜)后,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶标记的二抗体起反应,经过底物显色以检测电泳分离的特异性的蛋白。
显色液的使用要点:
1.请根据一抗来源选择试剂盒.
2 westem blotting dab显色法操作简单,但其敏感性与ecl发光发有一定的差距,一般只适用于丰度较高的蛋白.
3.可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深,可延长膜封闭时间,加长较终漂洗次数与时间。如果条带过弱,同远长抗体孵育时间。
4.如果*没有条带,请检查前期蛋白处理及实验过程,如果确认无误, 反复两次依旧无结果,请换用ecl发光法显色。
5. tbst (0.01m)配制方法:称取nacl8.5g,tris 1.21g,用800ml的双蒸水溶解,用盐酸调ph到76,再
加入0smltween-20,用双蒸水加至1000ml,混匀即可。(也可按照自己的配制习惯来配制)
显色液的保存:
-20c避光密闭保存,- 年有效。若经常使用,可将封闭试剂,抗体稀释液和20倍dab显色液b存放于2-8c以方便使用。
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