对于细胞培养样品:
1. 融解ripa裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入pmsf,使pmsf的终浓度为1mm。
2. 对于贴壁细胞:去除培养液,用pbs、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的page、western和免疫沉淀等操作。
细胞培养裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。
农残级n-甲基吡咯烷酮,1-甲基... 4l 甜味素(阿斯巴甜,天门冬酰苯丙氨... cdgg-012027-04-5pak 120mg/l于乙腈:水 1:1,5 x 2 ml
hplc级n-甲基吡咯烷酮,1-... 4l 甜味素(阿斯巴甜,天门冬酰苯丙氨... cdgg-012027-03-5pak 234mg/l于乙腈:水 1:1,5 x 2 ml
hplc级n-甲基吡咯烷酮,1-... 1l 甜味素(阿斯巴甜,天门冬酰苯丙氨... cdgg-012027-03 234mg/l于乙腈:水 1:1,2 ml
hplc级n-甲基吡咯烷酮,1-... 500ml 甜味素(阿斯巴甜,天门冬酰苯丙氨... cdgg-012027-02-5pak 390mg/l于乙腈:水 1:1,5 x 2 ml
细胞培养