elisa方法学在实验中运用的很广泛,5个实验3个实验都是用elisa法检测的,对于elisa实验中也是有多种方法学可以选择的,今天我们着重的讲解下elisa实验中竞争法检测抗-hbe,先来了解一下实验原理吧!
一、实验原理
用抗-hbe包被固相载体后,同时加被检血清和合适滴度中和试剂hbeag,若被检血清中含有抗-hbe,则与包被抗-hbe竞争结合hbeag,被检标本中抗-hbe越多,hbeag被结合越多,而与包被抗-hbe结合就越少,加底物后显色就越浅;反之越深。
二、主要试剂与器材
elisa试剂盒:内含已包被抗-hbe板条、hrp-抗hbe溶液、中和试剂hbeag溶液、阳性和阴性对照血清,底物溶液(a液、b液)、终止液、洗涤液。
三、结果分析
1.p/n≤0.3为阳性。p/n>0.3为阴性。
2.p/n=待检血清od值/阴性对照od值。
四、注意事项
1.试剂置2-4℃保存。取用时应先置室温平衡。干包被板条须密封防潮,冻存,取用后余者及时封存。
2.恰当选好hbeag的浓度。
3.试剂用前应摇匀。
五、操作步骤
1.加样:取出干包板条,按编号顺序分别加50μl待检血清、阴性对照血清和阳性对照血清于相应孔中。设空白对照孔,除此孔外,每孔加hbeag50μl、hrp-抗hbe50μl,振荡混匀后,置43℃(或37℃)温育1h。
2.洗涤:甩去孔内液体,用洗涤液注满各孔,静置20s,甩干。如此重复洗涤4次,在吸水纸上拍干。
3.显色:每孔加显色剂a、显色剂b各50μl,振荡混匀后置37℃避光显色10-15min。
4.终止:每孔加终止液50μl,振荡混匀。
5.酶标仪检测:选用450nm波长,用空白孔调零之后测各孔od值。
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