进口elisa试剂盒实验稀释血清的步骤：
先把蛋白稀释一定的倍数，比如说10倍、20倍稀释（这样可以大体确定一个参数），将抗原进行一系列稀释包被微量反应板，再用一定稀释度的阳性参考血清和阴性参考血清进行孵育后洗涤，再加酶结合物进行反应，经孵育洗涤后，加底物溶液显色，终止反应后分别测定o.d值，选择o.d值≥1.0的那个抗原稀释度为zui适包被浓度。一般总是要选择那个o.d值稍大于1.0，而不选择小于1.0的抗原浓度。阴性参考血清o.d值要求<0.1-0.2。也就是要求阳性参考血清和阴性参考血清的o.d值有明显差别。
双抗体夹心法
1. 包被：用0.05mph9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。
2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。
3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的tmb底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。5. 终止反应
6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+、“-号表示。也可测od值：在elisa检测仪上，于450nm（若以abts显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔od值，若大于规定的阴性对照od值的2.1倍，即为阳性。、
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