生化实验大全
苯*脱氨酶试验
(1)原理：
测定细菌是否产生苯*脱氨酶。细菌产生的苯*脱氨酶使苯*脱氨后生成苯丙酮酸，加入氯化铁试剂后产生绿色反应。
(2)培养基：
苯*琼脂培养基。
(3)实验方法：
将待检菌大量接种入苯*琼脂培养基中，35℃孵育18~24h，滴加10% 三氯化铁试剂3~4滴，自斜面上方流下。
(4)结果：
有绿色出现为阳性。应立即观察结果，延长反应时间会引起退色。
(5)应用：
主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。变形杆菌属、普罗威登菌属、摩根菌属均为阳性，肠杆菌科其它细菌均为阴性。
氨基酸脱羧酶试验
(1)原理：
某些细菌可产生氨基酸脱羧酶，能分解氨基酸使其脱羧生成胺和二氧化碳。由于胺的生成使培养基变为碱性，可用指示剂指示出来。
(2)培养基：
氨基酸脱羧酶培养基和氨基酸对照培养基。
(3)实验方法：
将待检菌分别接种于1支氨基酸(赖氨酸，*或*)脱羧酶试验管1支氨基酸脱羧酶对照管(无氨基酸)，各覆盖至少12.5px高度的无菌石蜡油，35℃孵育1~4d，每日观察结果。
(4)结果：
对照管应为黄色，若为溴甲酚紫指示剂，则测定管呈紫色则为阳性，若测定管呈黄色为阴性。若对照管呈现紫色则试验无意义，不能做出判断。
(5)应用：
主要用于肠杆菌科细菌的鉴别。如，沙门菌属中除伤寒和鸡沙门菌外，其余沙门菌的赖氨酸和*脱羧酶均为阳性。志贺菌属除宋内和鲍氏志贺菌外，其他志贺菌均为阴性。
(三)碳源和氮源的利用实验
唯1碳源利用实验
(1)原理：
在基础培养基只提供一种待检测碳源，若菌株生长则表明菌株能以此种碳源为唯1碳源，否则不能。
(2)培养基：
基本培养基：
(nh4)2hpo41g；nacl 1g；mgso4•7h2o 0.2 g；kh2po40.5 g；琼脂20g；蒸馏水1000ml；ph7.0-7.2。
各种碳源的终浓度如下：
糖类及其衍生物(醇类，糖苷类等)：1%，w/v；多醇和甘油：1%，w/v；苯甲酸盐，二酸盐，其它单酸盐：0.1%，w/v。糖类及其衍生物和多醇要求过滤除菌，盐类可加入培养基一起灭菌。
(3)实验方法：
将纯的菌株接种到培养基后培养14~28d，观察其生长情况，以不加碳源的培养基作对照。能够生长为阳性。
唯1氮源利用实验
(1)原理：
在基础培养基只提供一种待检测氮源，若菌株生长则表明菌株能以此种氮源为唯1碳源，否则不能
(2)培养基：
基础培养基：
d-glucose1g；mgso4•7h2o0.05 g；nacl 0.05 g；feso4•7h2o 0.001 g；kh2po4 0.01 g。不同氮源按0.5%的浓度加入。
(3)实验方法：
将纯的菌株接种到培养基后培养14~28d，观察其生长情况，以不加氮源的培养基作对照。能够生长为阳性。
(四)各种酶类实验
氧化酶试验
(1)原理：
氧化酶(即细胞色素氧化酶)，是细胞色素氧化酶系统中的终呼吸酶。具有氧化酶的细菌，首先使*氧化，再由氧化型*再使对苯二胺氧化，生成有色的醌类化合物。因此，本试验结果与*的存在有关。
(2)实验方法：
菌落法：直接滴加试剂于被检菌落上；滤纸法：取洁净滤纸一小块，蘸取菌少许，然后加试剂；试剂纸片法：将滤纸片浸泡于试剂中制成试剂纸片，取菌涂于试剂纸上。
(3)结果：
细菌在与试剂接触10秒内呈深紫色，为阳性。无色为阴性。为保证结果的准确性，分别以铜绿假单胞菌和大肠埃希菌作为阳性和阴性对照。
(4)应用：
主要用于肠杆菌科细菌和假单胞菌属的鉴别，前者阴性，而后者阳性。奈瑟菌属、莫拉菌属细菌也呈阳性反应。
过氧化氢酶试验(触酶试验)
(1)原理：
具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢成为水和原子态氧，继而形成氧分子，出现气泡。
(2)实验方法：
取洁净玻片1张，用接种环挑取细菌，加3%过氧化氢数滴，立即观察结果。
(3)结果：
若立即出现大量气泡为阳性。无气泡为阴性。
(4)应用：
革兰阳性球菌中，葡萄球菌和微球菌均产生过氧化氢酶，但链球菌科阴性，故该试验常用于革兰阳性球菌的初步分群。
硝酸盐还原实验
(1)原理：
硝酸盐还原反应包括两个过程：一是在合成代谢过程中，硝酸盐还原为亚硝酸盐和氨，再由氨转化为氨基酸和细胞内其它含氮化合物；二是在分解代谢过程中，硝酸盐或亚硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的终末受氢体。硝酸盐还原过程可因细菌不同而异。有的细菌仅使硝酸盐还原为亚硝酸盐，如大肠埃希菌等；有的细菌可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵；有的细菌能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮，如假单胞菌；有的细菌还可以将其还原产物在合成性代谢中*利用。
(2)实验方法：
将待检菌接种于硝酸盐培养基(内含小倒管)中，35℃孵育1~4d。将甲、乙等量混合液(用时混合)(约0.1ml)加于试管内，立即观察结果。
(3)结果：
出现红色为阳性反应。若加入试剂后无颜色反应，可能是：
①硝酸盐没有被还原，试验阴性；
②硝酸盐被还原为氨和氮等其他物质而导致假阴性结果，这时应在试管内加入少许锌粉，如出现红色则表明试验确实为阴性。若仍不产生红色，表明试验为假阴性。
若要观察是否有氮气产生，可于培养基管内加1只小导管，有气泡产生，则表示有氮气生成。
(4)应用：
本试验广泛用于细菌鉴定。肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐;铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等假单胞菌属均可产生氮气；有些厌氧菌如韦荣菌等试验也为阳性。
*实验
(1)原理：
有些细菌具有合成*的能力，可以分泌胞外*，*可以使淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖，淀粉水解后遇dian不在变蓝。
(2)培养基：
淀粉琼脂培养基。
(3)实验方法：
在淀粉培养基上接种实验菌株后，30℃培养1～2周后将平板取出，滴加少量卢戈氏dian液于平板上。观察菌苔周围的培养基有无色透明圈出现。