比色法
1.原理
维生素a在中与三氯化锑相互作用，产生蓝色物质，其深浅与溶液中所含维生素a的含量成正比。该蓝色物质虽不稳定，但在一定时间内可用分光光度计于620nm波长处测定其吸光度。
2.仪器
实验室常用设备 分光光度计 回流冷凝装置
3.试剂
本实验所用试剂皆为分析纯，所用水皆为蒸馏水
（1） * na2so4
（2） 乙酸酐
（3） 不含有过氧化物
（4） 无水乙醇 不含有醛类物质
（5） 应不含分解物，否则会破坏维生素a
检查方法：不稳定，放置后易受空气中氧的作用生成和光气。检查时可取少量置试管中加水振摇，使溶到水层。加入几滴*溶液，如有白色沉淀即说明中有分解产物。
（1） 25%三氯化锑-溶液 用配制25%三氯化锑溶液，储于棕色瓶中（注意避免吸收水分）
（6） 50%氢氧化钾溶液（koh） w/v
（7） 维生素a标准液 *（纯度85% sigma）用脱醛乙醇溶解维生素a标准品，使其浓度大约为1ml相当于1mg*。临用前用紫外分光光度法标定其准确浓度。
（8） *指示剂 用95%乙醇配制1%溶液
4. 操作步骤
维生素a极易被光破坏，实验操作应在微弱光线下进行。
4.1样品处理：根据样品性质，可采用皂化法或研磨法。
(1)皂化法：
皂化：根据样品中维生素a含量的不同，称取0.5g～5g样品于三角瓶中，加入20～40ml无水乙醇及10ml1：1氢氧化钾，于电热板上回流30min至皂化*为止。（皂化法适用于维生素a含量不高的样品，可减少脂溶性物质的干扰，但全部实验过程费时，且易导致维生素a 损失）
提取：将皂化瓶内混合物移至分液漏斗中，以30ml水洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗。如有渣子，可用脱脂棉漏斗滤入分液漏斗内。用50ml分二次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中。振摇并注意放气，静置分层后，水层放入**个分液漏斗内。皂化瓶再用约30ml分二次冲洗，洗液倾入**个分液漏斗中。振摇后，静置分层，水层放入三角瓶中，醚层与**个分液漏斗合并。重复至水液中无维生素a为止。
洗涤：用约30ml水加入**个分液漏斗中，轻轻振摇，静置片刻后，放去水层。加15～20ml 0.5mol/l氢氧化钾液于分液漏斗中，轻轻振摇后，弃去下层碱液，除去醚溶性酸皂。继续用水洗涤，每次用水约30ml，直至洗涤液与*指示剂呈无色为止（大约洗涤3次）。醚层液静置10～20min，小心放出析出的水。
浓缩：将醚层液经过*滤入三角瓶中，再用约25ml冲洗分液漏斗和硫酸钠两次，洗液并入三角瓶内。置水浴上蒸馏，回收。待瓶中剩约单位= 0.3μg维生素a）；
c： 由标准曲线上查得样品中含维生素a的含量，μg/ml；
m： 样品质量，g；
v： 提取后加定量之体积，ml；
100： 以每百克样品计。。
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