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高效液相色谱仪色谱柱出现问题怎么办

色谱柱是高效液相色谱仪分离样品的核心,也是仪器在使用过程中经常出现问题的部件。色谱柱出现问题后对仪器的检测结果有很大的影响,需要及时解决。那么,当色谱柱出现问题应该怎么办呢?
色谱柱压力不稳:
1.溶剂过滤头被污染,由于水相非常容易生长霉菌,若溶剂过滤头长时间浸泡在水相中则会被污染。解决方法是将溶剂过滤头拔下,分别用水、甲醇溶剂及超声清洗,如果过滤头为玻璃材质则不能超声清洗,应采用30%的硝酸浸泡,然后用去离子水清洗至中性。
2.单向阀被污染,单向阀的基本工作原理是流动相只能从阀的一端流人,另一端流出,即液体呈单向流动。单向阀的主要部件为宝石球和宝石球座,在使用含缓冲盐的流动相后,若单向阀球座上有无机盐细小固体颗粒的析出,会导致宝石球与球座密封性不好、流动相发生回流现象以及色谱柱压力不稳。解决方法是将单向阀小心拆卸下来,放入一盛有纯净水的小烧杯中,超声15min,将水换为甲醇,再超声15 min,按指示方向装入仪器即可。
色谱柱柱效下降:
新的色谱柱使用时应先用甲醇冲洗30min,然后用标准样品在hplc仪上测试其性能,并记录色谱柱的柱效。
色谱柱使用一段时间后会被污染导致柱效下降,可根据污染物不同分别处理。如极性污染物依次用水、甲醇、thf、甲醇、水、流动相冲洗;非极性污染物依次用甲醇、异丙醇、thf、二氯甲烷、正已烷、异丙醇、流动相冲洗。
如果是色谱预柱被污染,直接更换预柱即可。
如果是色谱柱进样口端的填料被污染,此时只能通过去掉进口端的部分填料,填入新的同品牌、相同颗粒的固定相,将色谱柱拧紧,用甲醇或乙腈反复冲洗,让固定相填充紧实、均匀,通过修补色谱柱提高柱效。
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