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Tris缓冲剂用于核酸与蛋白质电泳

tris缓冲液是蛋白质电泳和蛋白质印迹的组成部分。大多数sds-page凝胶、电泳缓冲液和印迹缓冲液都用tris缓冲。
tris缓冲液在蛋白质电泳中的应用
大多数sds凝胶使用不连续的tris缓冲系统。浓缩凝胶具有大孔,因此较大的肽可以轻松迁移通过,通常在ph6.7–6.8下配制。在此ph值下,离子化的氯离子会迅速迁移,从而提高它们后面的ph值并产生一个具有低电导率区域的电压梯度,这会导致*(来自运行缓冲液)电离并迁移到氯离子前沿后面。样品中的大多数肽由于结合了sds而带负电荷,在氯化物和*之间迁移,形成窄带,从而“堆积”。一旦堆栈到达分离凝胶,其处于较高的ph值(通常为ph值8.7-8.8),*的电离增加会使其加速并超过肽段。此外,较小孔径的分离胶开始产生筛分效果,导致肽段按大小分离。
大多数蛋白质印迹实验方案使用低离子强度的tris缓冲液进行蛋白质转移。转移时间取决于印迹装置的类型和感兴趣的肽大小范围。
tris缓冲液在核酸琼脂糖电泳中的应用
tris缓冲液广泛用于dna琼脂糖电泳。两种主要缓冲液是tbe(tris硼酸盐/edta)和tae(tris醋酸盐/edta)。尽管不同形式的dna的分辨率及其在电泳过程中的迁移率存在一些差异,但这些tris缓冲液通常可以互换使用。tbe中的硼酸盐离子会抑制许多酶,因此如果在电泳后不进行某种类型的dna纯化,一些酶介导的下游操作可能不起作用。因此,在大多数dna实验室中,tae缓冲液在日常使用中受到青睐。
制作tris缓冲液
tris缓冲液是大多数生物系统的不错选择,因为它在25°c时的pka值约为8.1,使其成为ph7-9范围内的有效缓冲液。该ph值范围适用于大多数生物过程。tris粉末也比更专业的缓冲液(如hepes)更便宜且更耐用。
有两种方法可以制备tris缓冲溶液。一种是制备所需浓度的tris碱和tris-hcl溶液,然后将一种溶液(通常为tris-hcl)的等分试样添加到另一种(通常为tris碱)溶液中,同时监测ph值直至获得正确的ph值。在实践中,很少这样做。
制作大多数常用tris缓冲液的常用方法是仅从tris碱基开始。将适量的tris粉末溶于水中,用hcl调节ph值,然后将缓冲液配制成所需体积。假设在调节ph值时没有过冲,该方法不会改变离子强度。但是,在过冲并用naoh重新调整后,或使用tris-hcl并用naoh调整ph值后,离子强度会发生变化。根据tris缓冲区的预期用途,此类更改可能重要也可能不重要。
制作tris缓冲液时,在调节ph值时使用与tris兼容的电极很重要。当与tris缓冲液一起使用时,单结ag/agcl电极会表现出不稳定性,因为银会逐渐沉淀并堵塞电极。使用双结或甘汞参比电极可确保在tris缓冲液中进行准确的ph测量。
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